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伸手触梦

银虫 (正式写手)

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[求助] 荧光定量测基因相对表达量已有2人参与

荧光定量测基因相对表达量，相同体系一个样品CT值正常，另一个CT值太大(30以后)且没有显现出平台期，怎么办？两个样品是要同时加大模板量吗？而且我要做10个基因且需要比较下两样本各自的十个基因表达差异。如果改体系，是不是所有的体系都得改呢?

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两个基因序列能不能做荧光定量PCR？请教大家一下！！！已经有4人回复

1楼2015-01-28 17:07:00

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logowang

铜虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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伸手触梦(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-01-28 22:10:40

刚写了半天，不知道为什么没发布成功，

简单说一下，你的目的基因是需要和内参进行比较的，也就是说，你ct较的数据是可以通过更改摸板浓度进行调节，因为只需要那个样品的目的基因和内参比较得出数据，该数据是均一化后数据，可以在不同的样品之间进行比较了。

如果你的目的基因和内参相差太多，没办法都控制在20-30内，那么需要更改你使用的内参基因，以实现特定浓度下，内参和目的基因可以比较。

关于体系更改，只要在一组样品内（处理组和为处理组），保持绝对一致就可以。但其实一般情况下都是一个未处理，n个处理组，这样的话，也就是所有样品保持一致