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伸手触梦

银虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量测基因相对表达量 已有2人参与

荧光定量测基因相对表达量,相同体系一个样品CT值正常,另一个CT值太大(30以后)且没有显现出平台期,怎么办?两个样品是要同时加大模板量吗?而且我要做10个基因且需要比较下两样本各自的十个基因表达差异。如果改体系,是不是所有的体系都得改呢?
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logowang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
伸手触梦(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-01-28 22:10:40
刚写了半天,不知道为什么没发布成功,

简单说一下,你的目的基因是需要和内参进行比较的,也就是说,你ct较的数据是可以通过更改摸板浓度进行调节,因为只需要那个样品的目的基因和内参比较得出数据,该数据是均一化后数据,可以在不同的样品之间进行比较了。

如果你的目的基因和内参相差太多,没办法都控制在20-30内,那么需要更改你使用的内参基因,以实现特定浓度下,内参和目的基因可以比较。

关于体系更改,只要在一组样品内(处理组和为处理组),保持绝对一致就可以。 但其实一般情况下都是一个未处理,n个处理组,这样的话,也就是所有样品保持一致
2楼2015-01-28 19:48:18
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
伸手触梦(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-28 22:10:47
根据统计学原理,想知道究竟哪个值是对的,那就必须做重复3+次
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
3楼2015-01-28 20:08:32
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伸手触梦

银虫 (正式写手)

谢谢楼上两位大侠的应助,现在才来处理,向技术顾问咨询后也明白,比较不同基因间的表达量是没有可比性的,就像2楼说的只要同一组样的体系、程序一致就行,在我这就是只要测一个基因在不同品种间的差异时,体系一致就OK
4楼2015-02-17 17:19:09
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