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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量测基因相对表达量
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伸手触梦

银虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量测基因相对表达量 已有2人参与

荧光定量测基因相对表达量，相同体系一个样品CT值正常，另一个CT值太大(30以后)且没有显现出平台期，怎么办？两个样品是要同时加大模板量吗？而且我要做10个基因且需要比较下两样本各自的十个基因表达差异。如果改体系，是不是所有的体系都得改呢?
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1楼 2015-01-28 17:07:00
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logowang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
伸手触梦(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-01-28 22:10:40
刚写了半天，不知道为什么没发布成功，

简单说一下，你的目的基因是需要和内参进行比较的，也就是说，你ct较的数据是可以通过更改摸板浓度进行调节，因为只需要那个样品的目的基因和内参比较得出数据，该数据是均一化后数据，可以在不同的样品之间进行比较了。

如果你的目的基因和内参相差太多，没办法都控制在20-30内，那么需要更改你使用的内参基因，以实现特定浓度下，内参和目的基因可以比较。

关于体系更改，只要在一组样品内（处理组和为处理组），保持绝对一致就可以。 但其实一般情况下都是一个未处理，n个处理组，这样的话，也就是所有样品保持一致
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2楼2015-01-28 19:48:18
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
伸手触梦(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-28 22:10:47
根据统计学原理，想知道究竟哪个值是对的，那就必须做重复3+次
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
3楼2015-01-28 20:08:32
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伸手触梦

银虫 (正式写手)
谢谢楼上两位大侠的应助，现在才来处理，向技术顾问咨询后也明白，比较不同基因间的表达量是没有可比性的，就像2楼说的只要同一组样的体系、程序一致就行，在我这就是只要测一个基因在不同品种间的差异时，体系一致就OK
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4楼2015-02-17 17:19:09
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