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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 关于检测RNA干扰的时间段
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lmc2537

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于检测RNA干扰的时间段 已有2人参与

近期做RNA干扰快发疯了，为什么同样的条件，有的时候有效率，有的时候没有效率，有的时候是24h干扰效率最好，有的时候是48h，难道每次都要不同时间点收样吗？大家的有没有遇到类似的问题，如何解决呢？已经确定转染效率肯定是没问题的。谢谢大家！
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1楼 2015-01-26 10:03:03
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lmc2537

铜虫 (小有名气)
合成的都是文献中的siRNA序列，因为之前一直以为是序列的问题，所以从不同文献找了几对siRNA序列，但是效率都没文献中所说的那么高。
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2楼2015-01-26 10:06:01
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lmc2537: 金币+5, ★有帮助 2015-01-26 11:41:49
你应该看看这个mirna的下游基因在某个时间段表达比较高，然后那个时间段检测我觉得应该能说明起的效率
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3楼2015-01-26 10:53:17
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lmc2537

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 红卫大兵 at 2015-01-26 10:53:17
你应该看看这个mirna的下游基因在某个时间段表达比较高，然后那个时间段检测我觉得应该能说明起的效率

我这个基因，我摸过24h/32h/48h/60h/72h, NC组感觉没什么变化
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4楼2015-01-26 11:41:37
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lmc2537

铜虫 (小有名气)
会不会是每次的细胞状态和密度不一样看，导致RNA降解的时间不一样，所以每次取相同时间点检测的话，有时候有效率，有时候无效率。
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5楼2015-01-26 11:53:25
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zshw_001

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lmc2537: 金币+5, ★有帮助 2015-01-27 16:04:00
注意一下不同生理状态下细胞内该基因的表达情况，选择一个基因表达高的阶段，何必设那么多时间段。
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永远相信未知的总是美好的！
6楼2015-01-26 17:16:50
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lmc2537

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zshw_001 at 2015-01-26 17:16:50
注意一下不同生理状态下细胞内该基因的表达情况，选择一个基因表达高的阶段，何必设那么多时间段。

我设置的时间点应该包含了不同生理状态下的基因表达吧，但是我这个蛋白基本无变化。
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7楼2015-01-27 16:02:55
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