| 查看: 5837 | 回复: 11 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
有关易错PCR 已有2人参与
|
|||
| 各位大神，我对易错PCR的Mg2+、Mn2+浓度进行摸索，条件一样、体系一样，但每次的结果不一样，也不知道原因在哪？有哪位大神遇到过这种情况？知道是什么原因吗？好捉急啊！！！而且用正常条件的PCR还时不时没有条带，还有用于易错PCR的Mn2+是直接购买?还是自己配？ |
回复此楼» 猜你喜欢
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
散金
已经有68人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有120人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 易错PCR酶切与连接
已经有23人回复
- 降落PCR求助！
已经有4人回复
- real-time PCR内参的问题
已经有8人回复
- pcr反应体系为何要加Mg离子
已经有10人回复
- 如何解释这个PCR结果？
已经有29人回复
- 关于定点突变中，突变氨基酸的选择原则
已经有8人回复
- 关于DTNB的使用
已经有7人回复
- 有没有哪位大侠在做易错PCR啊？请问你们用的氯化锰（MnCl2）都是在哪里买的？
已经有16人回复
- 关于易错PCR所使用的各项原料
已经有4人回复
- 有采用磷酸钠为原料合成氧化铈的吗？干燥后是什么颜色？
已经有10人回复
- qPCR文献里面的图，是怎么画的？
已经有9人回复
- 求全质粒定点突变高手解疑问
已经有16人回复
- 求DNA退火步骤
已经有15人回复
- 【求助/交流】新买来的dNTP为10MM,PCR时需要稀释多少呗啊
已经有8人回复
- 【求助】文献中关于使用LanL2DZ的疑问
已经有4人回复
- 【求助/交流】减少PCR错配
已经有12人回复
- 【求助】菜鸟请教大虾关于DSC的几个问题
已经有12人回复
- 【讨论】关于加权欧氏距离的权值
已经有4人回复
- 【求助/交流】定点突变-DpnI消化
已经有12人回复
- 【求助/交流】关于降落pcr的问题！
已经有4人回复
- 【求助】PCR试管所用材料
已经有4人回复
- 【求助/交流】向各位大虾请教“易错PCR”
已经有4人回复
18761615793
木虫 (正式写手)
小虫
- MolEPI: 1
- 应助: 172 (高中生)
- 金币: 646.4
- 散金: 170
- 红花: 16
- 帖子: 863
- 在线: 144.9小时
- 虫号: 3603131
- 注册: 2014-12-19
- 专业: 抗体工程学
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-21 21:09:34
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-21 21:09:34
|
如果对镁离子和锰离子的浓度进行摸索，扩增还是有问题，说明这两者是正常的，应该从其他方面考虑原因。 时不时的还没有条带的话，可以考虑一下酶的原因，不知道用的是什么酶呢？易错PCR的话，尽量采用有较低保真度的酶（如热启动Taq酶或者是性能较高的普通Taq酶http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html），不建议使用普通的Taq酶，不一定能扩增出来，且非特异性产物极易产生。 除了对酶、锰离子进行摸索之外，还要改变dNTP的浓度，不能使用KOD Pfu等类似的高保真酶，至于锰离子我认为还是用买的。 |
4楼2015-01-21 16:58:09
2楼2015-01-20 10:07:53
18761615793
木虫 (正式写手)
小虫
- MolEPI: 1
- 应助: 172 (高中生)
- 金币: 646.4
- 散金: 170
- 红花: 16
- 帖子: 863
- 在线: 144.9小时
- 虫号: 3603131
- 注册: 2014-12-19
- 专业: 抗体工程学
【答案】应助回帖
★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-21 21:09:26
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-21 21:09:26
|
如果对镁离子和锰离子的浓度进行摸索，扩增还是有问题，说明这两者是正常的，应该从其他方面考虑原因。 时不时的还没有条带的话，可以考虑一下酶的原因，不知道用的是什么酶呢？易错PCR的话，尽量采用有较低保真度的酶（如热启动Taq酶或者是性能较高的普通Taq酶http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html），不建议使用普通的Taq酶，不一定能扩增出来，且非特异性产物极易产生。 除了对酶、锰离子进行摸索之外，还要改变dNTP的浓度，不能使用KOD Pfu等类似的高保真酶，至于锰离子我认为还是用买的。 |
3楼2015-01-20 10:10:23
5楼2015-03-25 21:38:49
