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有关易错PCR 已有2人参与
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| 各位大神，我对易错PCR的Mg2+、Mn2+浓度进行摸索，条件一样、体系一样，但每次的结果不一样，也不知道原因在哪？有哪位大神遇到过这种情况？知道是什么原因吗？好捉急啊！！！而且用正常条件的PCR还时不时没有条带，还有用于易错PCR的Mn2+是直接购买?还是自己配？ |
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5楼2015-03-25 21:38:49
2楼2015-01-20 10:07:53
18761615793
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【答案】应助回帖
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如果对镁离子和锰离子的浓度进行摸索，扩增还是有问题，说明这两者是正常的，应该从其他方面考虑原因。 时不时的还没有条带的话，可以考虑一下酶的原因，不知道用的是什么酶呢？易错PCR的话，尽量采用有较低保真度的酶（如热启动Taq酶或者是性能较高的普通Taq酶http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html），不建议使用普通的Taq酶，不一定能扩增出来，且非特异性产物极易产生。 除了对酶、锰离子进行摸索之外，还要改变dNTP的浓度，不能使用KOD Pfu等类似的高保真酶，至于锰离子我认为还是用买的。 |
3楼2015-01-20 10:10:23
18761615793
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如果对镁离子和锰离子的浓度进行摸索，扩增还是有问题，说明这两者是正常的，应该从其他方面考虑原因。 时不时的还没有条带的话，可以考虑一下酶的原因，不知道用的是什么酶呢？易错PCR的话，尽量采用有较低保真度的酶（如热启动Taq酶或者是性能较高的普通Taq酶http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html），不建议使用普通的Taq酶，不一定能扩增出来，且非特异性产物极易产生。 除了对酶、锰离子进行摸索之外，还要改变dNTP的浓度，不能使用KOD Pfu等类似的高保真酶，至于锰离子我认为还是用买的。 |
4楼2015-01-21 16:58:09
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