| 查看: 2606 | 回复: 7 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
自己设计的引物添加了酶切位点之后总是P不出来条带来 已有1人参与
|
||
|
先把自己的序列与设计的引物放上来： TATCGAGAATGCACCAATGACCGCAATACATGACCGAGTACTAGCTTCTGGTCAATAAGGCATGTGTTAAACAGGGAAAAGAAACACATACTTCCATTCTGAATCACGGGGAGCATCACTTTCTAAAAACTCACTTGGAGCTTCACTGGGTGCTAGTTTTGAGCTTGGAAATACTGGTGATTTGGACGGCCCAGCGTTGCCCCTCGTTACATCACTACTTAAACCTATCTGTTGAGACATTGTAGAAGAGAAGGAACAAATGTACAACCAGATCGTGAACGGATGTCTTGTACGAAGATATTGCGGTAGTATGGAATTGATGCTCTCTACTCACTTGGATATCGAACTTACTTATAGTTGAATAGTCCACGAAGGATGGAGCCCTGAAGAATCATGTCTGATCAAGATAGATCGGAGGTTCCATGGCTTTTGGAATTGAAGCAACGCCACTCACGATATGTACGGTAGATTGTTAGGACAGATTATTGTTAAACCATCTAGAGAATCTTTCTCCTTAGATGTACGATTGGTACGGTGGGCAGGATTGTCATTTGTATTGCGGCACATCTTGATCGTTCCAATCACCACTGAAGTCGACAAAACCCTTGTTGTTTTATCGTTAGGAGATCAAAGACCACTGGTGGACCTTCTATTTTGGTTTTCTGGGGATTTTGTCAATAAGCTCGTTGTCGTTCGGGGTAAATTATGTAAGATGTGAGTAATAAAGTGGGCCGGACTGCCCGAGAATCCACGGACATTGAGGTCTTCACCATGGACAGACTCGAACTAGTATTTTCATATCATCATCATGTACGACAACTCCTTTCATTCTTCACGTACTCGCAATATCATCTTCAATTAATACACTTAACCTTCGGAGATTATTATTCGTGAAAGTTTTAGTCCATTTGCATCGAATCGGCATGAAGCGATCCCCGCCAATCGATTTGTCTCAGGACGGGCGTAAGGAGAAAATAGCTCGTCGACAGGACCCTGTCTCATGCCAGTTTTGTCGGGCCAAGAAACTCAAGGTAAGAATGCCACTCTAAGAAAGATAACGAATCGCTTCTGACTTCAATAGTGTGATCGCAATTTTCCATGCAGTAATTGCAGAGCTCGCAGACTTCCTTGCGTGTCAGCTGCAGGTCAAGCAGACACTCCAGGTTCCCAGCCGATTAATTCTGTCTCGGCAGGATCGTCAAGGTCAGTGCTGCGGCTTCAATGAGTTTTGCTAGCTTTGTCTCATTATTACTATAATAGTCAAGGGATTGAGGAGTTAAACGCCCGTCTGAGAAGGTTAGAGGAACTTCTAGAAAAAAACATCAATGTATCTAGAAGTTCGAGAGATACCGCATCTGGTATTGCTTTTTCCTTGCAACCCTTCTTGTATCAAATCCTGGCTGACAAAAGGCTAGTCGCCTCGACGCAAGAAACGCCTGCAGAAGATGCCCAAATTACAAATACAGTCTCGTGGTTAGAATCTGATGCTTTCGAGCACCGAAACCTCCAAGAGTCCACAAATTATGTAATTCTATTTCCCTAAAACTTAGCTTCGAAGCGCTAATCAAATAGAATCTTCTATGTTACAATGATGAAATCACACAAACTTTTGCTGCTTCCTTTTTAGGTACGTCGGCTACTACTGTACGAACAGGTGTCGACGCTCAAAGTTTGGCTTCACTTCCGTCTAGAAAGCATGCA 下游序列：，正向引物：5’—3’(SacII)AAACCGCGG（酶切位点）TCGTGAACGGATGTCTTG 反向引物5’—3’(KpnI)AAAGGTACC（酶切位点）GGACTCTTGGAGGTTTCG，自己设计的引物，构建载体时作为下游片段用的，正向的引物TM为66.6度。下游为63度。现在P出来的条带完全是弥散的。试过各种方法了，从换体系，梯度PCR到taq酶，所以想换引物了。求大虾帮助设计一下引物，酶切位点还是这两个。不胜感激。 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有126人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有1人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 引物3’端有发夹结构，一定p不出来吗
已经有13人回复
- 全长引物一直P不出目的条带来，请大神看一下我的引物设计有没有问题？谢啦！
已经有17人回复
- 引物设计时酶切位点的添加。
已经有4人回复
- 新人做qRT-PCR 引物怎么设计？
已经有5人回复
- 全长基因表达，关于酶切位点，关于ORF
已经有10人回复
- 明明只有一个的酶切位点，为什么切完总是两条带？
已经有5人回复
- 引物酶切位点问题
已经有23人回复
- 关于PCR引物中加入酶切位点的设计方法和酶切问题！ 新手，求帮忙！！
已经有4人回复
- 求助设计引物时酶切位点保护碱基的问题
已经有19人回复
- 求助设计引物加两个酶切位点
已经有10人回复
- 大侠们，帮我看一下这对引物的酶切位点是什么？
已经有20人回复
- 求助带酶切位点的引物设计
已经有5人回复
- 有关引物设计时加酶切位点
已经有8人回复
- 设计引物时酶切位点保护碱基的问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】我的PCR引物很好，但加酶切位点后扩不出来，不知道什么原因？
已经有16人回复
- 【求助/交流】设计引物引入酶切位点，如何保证没有发生阅读框移码？
已经有10人回复
- 【专题】引入酶切位点的引物设计问题
已经有11人回复
4楼2015-02-07 12:40:06
781055707
木虫 (著名写手)
- 应助: 291 (大学生)
- 金币: 3118.2
- 散金: 46
- 红花: 19
- 帖子: 2030
- 在线: 579.3小时
- 虫号: 3046113
- 注册: 2014-03-13
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2015-02-07 00:08:34
Annamandy
银虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 661.1
- 帖子: 40
- 在线: 17小时
- 虫号: 3803476
- 注册: 2015-04-11
- 性别: MM
- 专业: 遗传学与生物信息学
5楼2015-10-29 15:55:59
6楼2015-10-31 17:08:40
