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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 碱裂解法提取质粒不成功
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aotoulan

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1楼 2015-01-04 21:37:32
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aotoulan

禁虫 (小有名气)
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20楼2015-01-20 17:22:21
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普通回帖

稻稻

铜虫 (著名写手)
有点看不懂，你的意思是用提取的质粒做模板可以P出来但是质粒直接电泳看不到条带？

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2楼2015-01-04 23:57:33
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aotoulan

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3楼2015-01-05 12:37:59
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稻稻

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by aotoulan at 2015-01-05 12:37:59
如图上，我要提两种质粒，但提出来没有明显的质粒条带，用这个去做PCR验证的话能有目的条带...

哦，你用加溶液3离心后的上清来做pcr能扩出条带是吧？后面沉淀那一步是不是也看不到白色沉淀？

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4楼2015-01-05 13:00:26
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稻稻

铜虫 (著名写手)
我不是太清楚你的意思，你左边两个是菌落P C R，右边两个是提取的质粒？目的片段不到200b p吧？我师弟最近在构建载体，他是提出来的质粒做pcr能扩出来，但是酶切验证切不出来，很诡异…

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5楼2015-01-05 13:08:22
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鱼大喵

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
aotoulan: 金币+1, ★有帮助 2015-01-07 22:49:49
继续往下做表达看看呗。要不就拿这个提取的质粒再转top10，多摇点菌再重提
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6楼2015-01-05 13:19:20
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aotoulan

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7楼2015-01-05 13:56:58
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aotoulan

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8楼2015-01-05 13:58:37
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你觉得质粒小提试剂盒没问题的话，从转化进DH5A感受态吧，TOP10我也长在这个感受态上出问题。问下楼主，你用的是什么质粒呀。PUC吗？
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采菊东篱下，悠然见南山。
9楼2015-01-05 16:39:04
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aotoulan

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