应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 碱裂解法提取质粒不成功
242/3返回列表上一页123下一页
查看: 3019  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

781055707

木虫 (著名写手)
PET32A啊,低拷贝质粒，我用试剂盒提过夜的菌液，浓度才50NG/UL，跑电泳条带才一点点。楼主要不把菌液放在100UL的PCR反应管里平邮过来，我帮你提，顺带送我点PET32A的空载。
赞一下 回复此楼
采菊东篱下，悠然见南山。
11楼2015-01-06 09:45:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aotoulan

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
12楼2015-01-06 13:48:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by aotoulan at 2015-01-06 13:48:58
用试剂盒提取我也能提取出来，3ml过夜菌提出来的浓度和你的差不多，这不试剂盒用完了只有自己配试剂提了，幸好昨天发现了别的试剂盒，几个试剂盒拼凑起来已经提出来了。只是想知道为什么这个没提出来？...

几个试剂盒拼凑起来能提出来，自己配的提不出来，试剂的PH,SDS,NAOH,H2SO4很难保证每样都好用的呀。楼主你知道试剂盒里每样化学物的作用吗？
赞一下 回复此楼
采菊东篱下，悠然见南山。
13楼2015-01-06 14:19:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aotoulan

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
14楼2015-01-06 15:15:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦影清扬

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
aotoulan: 金币+2, ★有帮助, 我想我已经找到了原因了后面试试 2015-01-07 22:53:51
看电泳图，还是有质粒提取出来的（有白色条带），PCR扩增还是可以出目的条带的，但是酶切的话还是少了。如果需要浓度高的质粒可以增加样本数。或者你要看离心取上清时有没有把沉淀也洗去了。
赞一下 回复此楼
15楼2015-01-07 11:05:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

翼在天

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

首先，PCR的灵敏度比较高，你在之前做菌落PCR是如果直接从转化体系的平板上挑菌，可能沾染上未转入菌体的连接好的质粒，也会有目的条带出现；其次，碱抽提所得的质粒会存在一定程度的菌体DNA和RNA的污染，如果目的片段在原菌基因组中存在，那么用质粒小提所得的洗脱液进行PCR也有可能出现目的条带（以原菌DNA为模板）
赞一下 回复此楼
16楼2015-01-08 11:20:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aotoulan

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
17楼2015-01-08 16:15:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

翼在天

银虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by aotoulan at 2015-01-08 16:15:03
谢谢你的提醒，不过同时以不含重组质粒的菌为阴性对照做菌落PCR(培养啊、体系啊等操作都一样的)，这个应该就是你说的原菌基因组情况吧，没有P出目的条带...

恩，对，那就能排除这个了。
赞一下 回复此楼
18楼2015-01-08 16:26:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

米小爷

新虫 (初入文坛)
楼主 你有质粒提取的具体流程没、？
赞一下 回复此楼
19楼2015-01-20 15:45:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aotoulan

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
20楼2015-01-20 17:22:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 aotoulan 的主题更新
242/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 oepdf5z972 2026-06-20 3/150 2026-06-21 21:01 by zo4669e5n4
[基金申请] E0414, 我的本子有没有希望？ +7 布布和一二 2026-06-17 9/450 2026-06-21 19:29 by 布布和一二
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 18:58 by q1p9ixelzp
[公派出国] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 18:00 by q1p9ixelzp
[考研] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 4/200 2026-06-21 17:45 by q1p9ixelzp
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 17:40 by q1p9ixelzp
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 17:37 by q1p9ixelzp
[公派出国] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 4/200 2026-06-21 17:25 by ky8v3skvft
[考博] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 5/250 2026-06-21 17:20 by ky8v3skvft
[博后之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 6/300 2026-06-21 17:05 by ky8v3skvft
[公派出国] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 5/250 2026-06-21 17:00 by ky8v3skvft
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +5 vlfdw50o0u 2026-06-20 7/350 2026-06-21 16:57 by ky8v3skvft
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 vlfdw50o0u 2026-06-20 5/250 2026-06-21 16:45 by ky8v3skvft
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 7/350 2026-06-21 16:40 by ky8v3skvft
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 9/450 2026-06-21 16:37 by ky8v3skvft
[基金申请] 青A35岁以下通知答辩了吗 +3 暨阳一只柴 2026-06-17 3/150 2026-06-21 09:39 by kudofaye
[考博] 【全奖博士/科研助理/博后招生】新加坡南洋理工大学机械与航空航天学院 +3 robohaha 2026-06-15 4/200 2026-06-21 00:36 by lanbing1
[基金申请] 希望面上有个好结果 +7 碧水00 2026-06-16 7/350 2026-06-18 12:18 by wuke100666
[论文投稿] 三区计算机方向期刊推荐 +5 1457340941 2026-06-15 5/250 2026-06-17 13:16 by 会议编辑
[论文投稿] sci论文二审求助 +5 潘倍倍 2026-06-15 5/250 2026-06-16 10:15 by xs74101122
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭