| 查看: 981 | 回复: 4 | ||
[求助]
油松蛋白提取 求助！！！！！！！！ 已有1人参与
|
|
最近在提油松蛋白 但效果不理想 恳请高人指点 (1)取-80℃冻存的油松针叶1g研磨成粉末（研磨时按其鲜重的10%加入水不溶性PVPP）； (2)加入3倍体积预冷的蛋白提取液Ⅰ（三氯乙酸10%，巯基乙醇0.07%，丙酮100ml），-20℃沉淀过夜； (3)4℃，10000rpm/min离心30min，弃上清，用3倍于沉淀体积预冷的蛋白提取液Ⅱ（巯基乙醇0.07%，丙酮100ml）将沉淀混匀，-20℃沉淀1h； (4)重复(3)，洗涤沉淀 3-4 次，至蛋白为纯白色，弃去上清； (5)将沉淀冷冻干燥； (6)取0.1-0.2g干粉，加入2mL平衡酚和2mL SDS buffer（30%蔗糖，2%SDS，0.1mol/L Tris-Cl pH8.0，5%β-巯基乙醇）； (7)彻底涡旋，4℃，10000rpm/min离心3min，酚相被分开； (8)上层的酚相吸出，在酚相中加入至少5倍体积0.1mol/L冷醋酸铵甲醇溶液，-20℃沉降30 min； (9)4℃，10000rpm/min离心5min，再用冷醋酸铵甲醇洗沉淀两次，80%丙酮洗两次，沉淀冷冻干燥。 (10)将蛋白干粉加入裂解液，涡旋混匀，26°c水浴1h，离心，取上清。 提出的蛋白量很少 而且最后用裂解液溶液时 蛋白不易溶 不知是哪里有问题 望哪位大侠不吝赐教啊 ！！！万分感谢！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全
已经有4人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全
已经有4人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全
已经有5人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全
已经有4人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全
已经有6人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全
已经有6人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全
已经有6人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全
已经有7人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全
已经有7人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全
已经有7人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助:癌细胞糖蛋白的提取？
已经有3人回复
- 多糖提取 除去蛋白和淀粉
已经有6人回复
- Triton X-114法提取膜蛋白
已经有18人回复
- 求助从动物体提取某种特定蛋白的方法
已经有10人回复
- 关于昆虫蛋白质提取的问题
已经有29人回复
- 求助，玉米胚乳中提取蛋白质
已经有5人回复
- 提取的蛋白做SDS-PAEG时上样量可以不同吗？
已经有10人回复
- 请教提取拟南芥叶片总蛋白SDS-PAGE时较亮的条带对应的蛋白？
已经有29人回复
- 胶原蛋白的提取前处理，除脂
已经有8人回复
- 菜鸟求助，我们在提取蛋白的时候有变性裂解液和非变性裂解液，他们有什么区别
已经有4人回复
- 求助 双向电泳提取的蛋白质 其浓度用什么测呀？
已经有16人回复
- 细胞提取蛋白，做western blotting，怎么知道是提取总蛋白还是膜蛋白呢？
已经有4人回复
- 请教大豆种子蛋白提取方法用于western blot
已经有5人回复
- 【资料】植物总蛋白提取方法
已经有80人回复
- 【求助】+ 提取的蛋白含量太低
已经有5人回复
- 【求助】真菌中已变性的蛋白质的提取方法
已经有5人回复
- 【求助】蛋白提取
已经有6人回复
- 【求助/交流】核蛋白的提取，有谁知道具体方案？
已经有6人回复
- 【求助/交流】细胞核内蛋白和细胞浆蛋白提取有什么区别？
已经有4人回复
- 【求助】植物蛋白质提取纯化方法
已经有12人回复
- 【求助】蛋白提取率的问题
已经有13人回复
2楼2014-12-25 21:27:55
3楼2014-12-30 15:19:43
4楼2014-12-31 02:23:18
5楼2015-01-04 11:14:57
10