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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 求助蛋白复性透析问题·····
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luca5s

金虫 (小有名气)

[求助] 求助蛋白复性透析问题····· 已有2人参与

求助啊。。。。
LZ我已经看了很多关于变性复性透析的帖子，但是还是有一些解决不了的问题，不明白，不知道怎么办，所以来求助万能的虫子们了。
我是8m尿素变性，2m尿素复性，稀释复性，就是把变性液一滴一滴往复性液里加。蛋白变性之后，浓度在10mg/ml左右，复性后在0.2-0.4mg/ml左右，那么问题来了：
1.复性之后，蛋白复性液中总是有颗粒转，纤维状的物体，但是离心离不下来，整体看复性液还透明清澈，就像里面有毛毛的感觉，怎么离心都没用。
2.然后透析，用pbs透析，复性液ph在9.0，pbs没调ph，应该7.5左右吧，透析过程中没见明显沉淀，但是透析两天后换了3次液，透析过后的蛋白没有明显沉淀，但是浑浊，在透析袋离看不出浑浊，一倒出来就混了，而且跑蛋白胶什么都没有，测浓度，用水调零，什么都没有，用pbs调零，浓度能0.1mg/ml。
各位虫友们，有想法建议的跟我说说呗，愁死了。。。。
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咳咳
1楼 2014-12-20 09:08:44
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haze12344

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

毛毛的东西应该是析出的尿素。不知道你复性后是做什么的，我是拿来做多抗，就是有白色混混的也没有问题
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生物你好
4楼2015-02-16 09:40:03
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xissy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

遇到过这种问题，复性后的蛋白还是乳白色的样子，后来直接用了，发现可以用。你可以试试过滤，看是否可以过滤的下来。
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2楼2015-01-14 15:12:09
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luca5s

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xissy at 2015-01-14 15:12:09
遇到过这种问题，复性后的蛋白还是乳白色的样子，后来直接用了，发现可以用。你可以试试过滤，看是否可以过滤的下来。

变性复性是个坑···
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咳咳
3楼2015-01-14 16:06:05
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