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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » pET28载体蛋白表达框
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susannawsj

铜虫 (初入文坛)

[求助] pET28载体蛋白表达框 已有2人参与

我设计引物扩增出来的目的基因本身是带有ATG的（酶切位点BamHI和HindIII），我想要的蛋白就只是从该位点开始，只用后面的那个His-tag；但是我看到pET28本身rbs后有ATG，而且在T7tag和MCS前面都有ATG。现在很纠结，pET28表达我的目的基因时，翻译出来的第一个蛋白是从那个ATG开始的？我现在已经开始诱导表达了，还能不能愉快的获得我想要的目的蛋白了？？？求帮助~~~
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1楼 2014-12-17 22:12:24
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赵鑫易

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-18 16:34:03
从RBS之后第一个ATG开始，保证第一个ATG到你的ATG之间是3的倍数
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2楼2014-12-17 23:38:15
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hmily890404

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-18 16:34:11
就是从第一个ATG开始，读到你自己的基因的时候不要出现移码，就可以正确表达。如果移码了，就不能。

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3楼2014-12-18 00:51:20
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susannawsj

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 赵鑫易 at 2014-12-17 23:38:15
从RBS之后第一个ATG开始，保证第一个ATG到你的ATG之间是3的倍数

那就是说，翻译出的蛋白序列中我的目标蛋白前面还有其他AA序列喽？
如果我不想要从rbs后ATG到我的ATG之间的那部分，就要重新改一下酶切位点了？
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4楼2014-12-18 12:54:39
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