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2013201621

铁虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量PCR绝对定量的标曲问题已有1人参与

最近在做绝对定量,土壤样品细菌和真菌的丰度。关于标曲的问题,克隆测序正确,提完质粒(标准质粒,用于制作标曲)以后,到底要不要将质粒酶切线性化啊?我认为没有必要,可是看到一些论坛里有人说要酶切,以至于现在做的时候总感觉有点没搞清楚到底要不要酶切啊。有在做的虫友纠结这个问题吗?求指点~~~~
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FIGHTING
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研究室新生

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 肥猫p at 2014-12-14 20:05:59
我做过,没有线性化,我觉得没必要,我直接质粒做的,R2还可以。之前看有的paper说需要线性化,有的文章又说没影响,线性化后反而不稳定了。
楼主原核和真核都用的什么引物啊,有空能交流交流么?

你好~请问是否需要做线性化的文章楼楼那里还有吗?能不能发我看一下~最近也在做外源基因拷贝数绝对定量~用质粒做的标准品~质粒扩增效率不高~只有70%左右~不知道是不是因为没有做线性化的问题?~~另外线性化之后需要纯化处理吗?~~~急急~~谢谢楼主

发自小木虫Android客户端
人生是一棵不停生长的树。
7楼2016-08-09 10:56:13
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