| 查看: 2292 | 回复: 11 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
植物RNA一直提不出来，是什么原因？ 已有2人参与
|
||
|
虽然知道RNA很难提，但是没想到这么难。浏览了小木虫大部分关于提RNA的帖子，也用了其中很多经验，但是还是提不出来。 我说一下实验过程，还望有经验的朋友指导一番。 首先研磨是在超净工作台里进行的，之前研钵用DEPC水泡过一夜，离心管和枪头都是买的无核酶的。 1、研钵预冷，在无核酶的离心管里先加入1ml trizol（trizol 用过全式金，罗氏，invitrogen，都没提出来  ）2、加液氮研磨，期间会加液氮三到四次，磨到变成粉末，迅速加入到离心管中（植物组织保证<50mg），充分震荡后静置10min。 3、加入200ul氯仿，充分震荡30s，静置15min 4、12000r/m 4℃离心15min，取400ul上清于新的管子（保证不吸到中间层），加入 500ul异丙醇后颠倒混匀，静置10min 5、12000r/m 4℃离心10min，去上清 6、加75%乙醇（DEPC水配置的），剧烈涡旋 7、12000r/m 4℃离心1min，去上清，再晾干 8、加30ulRNA溶解液。 测出来的A260/280有些是在2左右，但是一跑胶就变成弥散的带。（跑胶槽是用的公用的） 但是大部分都在1.6左右。 心急，不知道原因出在何处，有没有大神解答一下，不胜感激啊 |
回复此楼» 猜你喜欢
江苏省优青门槛
已经有20人回复
-
心好累。今年我们部门提交了18个项目。中了11了，可惜我的又挂了
已经有10人回复
-
植物学论文润色/翻译怎么收费?
已经有113人回复
-
面上项目计划书
已经有7人回复
-
面上项目计划书附件
已经有9人回复
-
面上项目计划书系统状态
已经有18人回复
-
NSFC-UNEP（与联合国环境规划署）合作项目
已经有33人回复
-
和伊朗人合作
已经有32人回复
-
江苏省自然基金
已经有7人回复
-
生命科学新英文普刊《INVESTIGATION OF LIFE SCIENCE》
已经有8人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 水稻叶片RNA提取
已经有5人回复
- rna提取的量少，质量高，分析不出原因
已经有3人回复
- RNA提取，怎么老是降解？求指导！！
已经有24人回复
- 提取RNA的植物组织，液氮可以储存多久
已经有8人回复
- 一直提不出棉花的总RNA，要崩溃了
已经有16人回复
- 提取的RNA样本，经过DNA酶处理，但总是处理不干净
已经有12人回复
- 提取DNA，浓度一直很低，请叫原因
已经有5人回复
- 提RNA的叶片如何保存
已经有13人回复
- 植物细胞RNA提取用的研钵要高温灭菌么？
已经有16人回复
- 土壤微生物DNA提取不出来，是什么原因？
已经有19人回复
- 提取植物RNA的实验过程需要注意哪些细节？
已经有4人回复
- 植物根系RNA提取，260/230过低怎么办？
已经有6人回复
- 提取RNA条带28/18为什么总是不成两倍关系啊？
已经有5人回复
- PCR提总RNA时，最后溶于DEPC水时有沉淀，不能完全溶解，是什么原因，能怎么补救
已经有8人回复
- 提取植物DNA，求助~~~
已经有21人回复
- 请大家鉴定一下，提取的木本植物RNA的质量如何？
已经有6人回复
- 新手用试剂盒提取植物RNA时的一些小问题
已经有21人回复
- 植物RNA提取，跑出五条带。并且一直降解，快疯了！！！
已经有9人回复
- 急啊，求助提取RNA前，植物叶片采集的问题
已经有20人回复
- 植物RNA的提取
已经有22人回复
- SDS-LiCl提取植物RNA
已经有15人回复
- 植物RNA提取后电泳检测
已经有16人回复
- 植物RNA提取试剂盒
已经有9人回复
- 关于RNA提取过程中的问题
已经有3人回复
- 【求助/交流】请教植物RNA提取和转录组学
已经有16人回复
天心擎亮
铜虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 82.7
- 散金: 50
- 帖子: 63
- 在线: 13.7小时
- 虫号: 2469528
- 注册: 2013-05-17
- 性别: GG
- 专业: 植物化学保护
6楼2014-12-08 21:02:02
董博士
金虫 (正式写手)
- 应助: 155 (高中生)
- 金币: 3129.9
- 红花: 24
- 帖子: 312
- 在线: 96.2小时
- 虫号: 3524307
- 注册: 2014-11-07
- 专业: 医学图像数据处理与分析
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
赵小斯: 金币+5, ★有帮助 2014-12-07 20:32:32
感谢参与，应助指数 +1
赵小斯: 金币+5, ★有帮助 2014-12-07 20:32:32
|
说说我的经验： 1. 为什么植物组织保证<50mg？我一般都是100mg左右，太少了，也不好提取的 2. 研磨是至关重要的。 研磨没有必要在超净台中，但一定要在冰上。事先在冰山捶个小洞，差不多就是你研钵的大小。将预冷后的研钵放在洞上，加入液氮冷却，直到保持研钵中的液氮不再外溅。 然后，放入植物组织，在有不少液氮的时候，轻轻将组织敲碎，或研磨碎。在液氮挥发的差不多的时候，快速研磨成粉末；这个时候，时间不宜太长，如果觉得时间不够，就再加点液氮（加的时候一定要注意，研钵温度要低，不要把组织溅出来） 研磨好后，迅速将离心管中的 trizol倒入研钵中（要保证研钵温度要低），边倒边用钵棒均开，保证 trizol均匀的覆盖在粉末材料上。 以上过程一定要迅速再迅速。 这个时候，就可以把研钵放在实验台上了，在 trizol融化的过程中，要及时将材料和覆盖在材料上的 trizol混匀，这样就会保证RNA不会被降解了。 |
2楼2014-12-07 20:14:49
3楼2014-12-07 20:21:28
chenzhu198
铁杆木虫 (著名写手)
版主
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 9011.8
- 散金: 35
- 红花: 2
- 帖子: 1148
- 在线: 645.7小时
- 虫号: 800511
- 注册: 2009-06-28
- 性别: GG
- 专业: 等离子体物理
4楼2014-12-08 09:30:29
5