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植物RNA一直提不出来，是什么原因？已有2人参与
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虽然知道RNA很难提，但是没想到这么难。浏览了小木虫大部分关于提RNA的帖子，也用了其中很多经验，但是还是提不出来。 我说一下实验过程，还望有经验的朋友指导一番。 首先研磨是在超净工作台里进行的，之前研钵用DEPC水泡过一夜，离心管和枪头都是买的无核酶的。 1、研钵预冷，在无核酶的离心管里先加入1ml trizol（trizol 用过全式金，罗氏，invitrogen，都没提出来  ）2、加液氮研磨，期间会加液氮三到四次，磨到变成粉末，迅速加入到离心管中（植物组织保证<50mg），充分震荡后静置10min。 3、加入200ul氯仿，充分震荡30s，静置15min 4、12000r/m 4℃离心15min，取400ul上清于新的管子（保证不吸到中间层），加入 500ul异丙醇后颠倒混匀，静置10min 5、12000r/m 4℃离心10min，去上清 6、加75%乙醇（DEPC水配置的），剧烈涡旋 7、12000r/m 4℃离心1min，去上清，再晾干 8、加30ulRNA溶解液。 测出来的A260/280有些是在2左右，但是一跑胶就变成弥散的带。（跑胶槽是用的公用的） 但是大部分都在1.6左右。 心急，不知道原因出在何处，有没有大神解答一下，不胜感激啊 |
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董博士
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
赵小斯: 金币+5, ★有帮助 2014-12-07 20:32:32
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赵小斯: 金币+5, ★有帮助 2014-12-07 20:32:32
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说说我的经验： 1. 为什么植物组织保证<50mg？我一般都是100mg左右，太少了，也不好提取的 2. 研磨是至关重要的。 研磨没有必要在超净台中，但一定要在冰上。事先在冰山捶个小洞，差不多就是你研钵的大小。将预冷后的研钵放在洞上，加入液氮冷却，直到保持研钵中的液氮不再外溅。 然后，放入植物组织，在有不少液氮的时候，轻轻将组织敲碎，或研磨碎。在液氮挥发的差不多的时候，快速研磨成粉末；这个时候，时间不宜太长，如果觉得时间不够，就再加点液氮（加的时候一定要注意，研钵温度要低，不要把组织溅出来） 研磨好后，迅速将离心管中的 trizol倒入研钵中（要保证研钵温度要低），边倒边用钵棒均开，保证 trizol均匀的覆盖在粉末材料上。 以上过程一定要迅速再迅速。 这个时候，就可以把研钵放在实验台上了，在 trizol融化的过程中，要及时将材料和覆盖在材料上的 trizol混匀，这样就会保证RNA不会被降解了。 |
2楼2014-12-07 20:14:49
3楼2014-12-07 20:21:28
chenzhu198
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