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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 定点突变测序结果居然没有突变上，什么原因
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1360548549

金虫 (初入文坛)

[交流] 定点突变测序结果居然没有突变上，什么原因 已有5人参与

我正在做定点突变，利用导师设计好的定点突变引物扩增后，dpn1酶解去除未点突变的模板，然后进行T载体连接转化（有设对照，对照未长），送去测序后，居然没有测到点突变，这是什么原因呢？
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1楼 2014-11-23 20:28:56
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
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6楼: Originally posted by 1360548549 at 2014-11-26 00:29:11
之前用的是mbp载体，连接T载体是测序用的；我是从重组的mbp载体上扩增目的片段，然后连接到T载体，送去测序，看我的目的片段有没有正确点突变，这个方法可行吗，您一般都怎么做呢...

哦，我只是觉得直接可以用mbp载体测序，t载体比测序引物贵多了
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
9楼2014-11-26 23:27:48
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yingxiaoying

新虫 (初入文坛)
★ ★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-24 12:33:43
换扩增酶试试 高保真的可能在pcr时就自动修复了
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2014-11-24 09:49:22
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
定点突变用t载体？
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
3楼2014-11-26 05:20:55
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xiaoyugutou

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
if your mutant is on primer, I guess its the problem of primer
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4楼2014-11-26 05:58:43
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