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lijia2054224

金虫 (初入文坛)

[求助] 各位,我800bp的基因测序后有3个点突变,后续能做表达用吗? 已有1人参与

各位,我有个800bp的基因,用takara的Ex-taq酶扩的,直接连到表达载体上,然后送测序,结果发现中间位置有三个点突变,不是同义突变,请问各位我能用这个载体继续往后做吗?我是要做蛋白胡做的。
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流, 2014-03-06 08:31:11
lijia2054224: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-03-25 12:33:54
肯定不行,你无法确定这三个突变的是否影响蛋白相互作用。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2014-03-05 23:02:13
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-03-06 08:31:16
..............
    TaKaRa的Ex-Taq什么时候这么垃圾了,800bp就3个突变.........如果你只测了一个反应,建议你双向测通再看看,有时候测序的事情也说不准,我偶遇过正向一次不对,正向第二个反应+反向重叠时是对的。希望你拿测序图好好对对。据我个人经验,TaKaRa的Ex-Taq不会这么糟糕,我遇到的是2000bp左右有一个突变。
Let God do with it as He wills
3楼2014-03-06 06:37:30
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eclipse88

银虫 (小有名气)

重新够吧 800bp的片段不算大的 为什么不用高保真酶扩增呢?
4楼2014-03-06 08:24:40
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woolley

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流! 2014-03-31 00:53:37
一般Taq的突变率不会那么高
你可以再挑几个test通过的点进行测序
至于点突变是否影响,你可以把你的突变序列放到NCBI的数据库中blast(建议用蛋白序列)
有可能是你扩展的模板就突变了,比如从大肠杆菌中扩充基因,你比对的是数据库里的标准菌株的序列,而你们实验室使用的菌株本来就有突变,这样的话,你就可以到NCBI的数据库中blast,只要能找到100%一致的结果就可以继续往下做
5楼2014-03-06 09:27:46
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lijia2054224

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by atlanticwi at 2014-03-06 06:37:30
..............
    TaKaRa的Ex-Taq什么时候这么垃圾了,800bp就3个突变.........如果你只测了一个反应,建议你双向测通再看看,有时候测序的事情也说不准,我偶遇过正向一次不对,正向第二个反应+反向重叠时是对的 ...

我也觉得这个酶突变率没这么高,可是突变的位置是一个反应的中间部分,测序峰图看上去也是准确的,而且800bp一个反应基本上就能测通了。。。貌似我得重做了。。。
6楼2014-03-06 10:07:22
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lijia2054224

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by eclipse88 at 2014-03-06 08:24:40
重新够吧 800bp的片段不算大的 为什么不用高保真酶扩增呢?

嗯,我也决定用高保真酶重新扩增吧,多谢了!
7楼2014-03-06 10:08:50
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lijia2054224

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2014-03-05 23:02:13
肯定不行,你无法确定这三个突变的是否影响蛋白相互作用。

亲,谢谢你,言简意赅呀
8楼2014-03-06 10:10:00
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