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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 各位，我800bp的基因测序后有3个点突变，后续能做表达用吗？
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lijia2054224

金虫 (初入文坛)

[求助] 各位，我800bp的基因测序后有3个点突变，后续能做表达用吗？ 已有1人参与

各位，我有个800bp的基因，用takara的Ex-taq酶扩的，直接连到表达载体上，然后送测序，结果发现中间位置有三个点突变，不是同义突变，请问各位我能用这个载体继续往后做吗？我是要做蛋白胡做的。
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1楼 2014-03-05 21:53:41
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流, 2014-03-06 08:31:11
lijia2054224: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-03-25 12:33:54
肯定不行，你无法确定这三个突变的是否影响蛋白相互作用。
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2014-03-05 23:02:13
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-03-06 08:31:16
..............
    TaKaRa的Ex-Taq什么时候这么垃圾了，800bp就3个突变.........如果你只测了一个反应，建议你双向测通再看看，有时候测序的事情也说不准，我偶遇过正向一次不对，正向第二个反应+反向重叠时是对的。希望你拿测序图好好对对。据我个人经验，TaKaRa的Ex-Taq不会这么糟糕，我遇到的是2000bp左右有一个突变。
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Let God do with it as He wills
3楼2014-03-06 06:37:30
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eclipse88

银虫 (小有名气)
重新够吧 800bp的片段不算大的 为什么不用高保真酶扩增呢？
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4楼2014-03-06 08:24:40
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woolley

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 00:53:37
一般Taq的突变率不会那么高
你可以再挑几个test通过的点进行测序
至于点突变是否影响，你可以把你的突变序列放到NCBI的数据库中blast（建议用蛋白序列）
有可能是你扩展的模板就突变了，比如从大肠杆菌中扩充基因，你比对的是数据库里的标准菌株的序列，而你们实验室使用的菌株本来就有突变，这样的话，你就可以到NCBI的数据库中blast，只要能找到100%一致的结果就可以继续往下做
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5楼2014-03-06 09:27:46
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lijia2054224

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by atlanticwi at 2014-03-06 06:37:30
..............
    TaKaRa的Ex-Taq什么时候这么垃圾了，800bp就3个突变.........如果你只测了一个反应，建议你双向测通再看看，有时候测序的事情也说不准，我偶遇过正向一次不对，正向第二个反应+反向重叠时是对的 ...

我也觉得这个酶突变率没这么高，可是突变的位置是一个反应的中间部分，测序峰图看上去也是准确的，而且800bp一个反应基本上就能测通了。。。貌似我得重做了。。。
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6楼2014-03-06 10:07:22
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lijia2054224

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by eclipse88 at 2014-03-06 08:24:40
重新够吧 800bp的片段不算大的 为什么不用高保真酶扩增呢？

嗯，我也决定用高保真酶重新扩增吧，多谢了！
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7楼2014-03-06 10:08:50
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lijia2054224

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2014-03-05 23:02:13
肯定不行，你无法确定这三个突变的是否影响蛋白相互作用。

亲，谢谢你，言简意赅呀
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8楼2014-03-06 10:10:00
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