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金虫 (初入文坛)

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[交流] 定点突变测序结果居然没有突变上，什么原因已有5人参与

我正在做定点突变，利用导师设计好的定点突变引物扩增后，dpn1酶解去除未点突变的模板，然后进行T载体连接转化（有设对照，对照未长），送去测序后，居然没有测到点突变，这是什么原因呢？

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1楼 2014-11-23 20:28:56

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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

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定点突变用t载体？

The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.

3楼2014-11-26 05:20:55

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yingxiaoying

新虫 (初入文坛)

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-24 12:33:43

换扩增酶试试高保真的可能在pcr时就自动修复了

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2楼2014-11-24 09:49:22

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xiaoyugutou

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if your mutant is on primer, I guess its the problem of primer

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4楼2014-11-26 05:58:43

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金虫 (初入文坛)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by yingxiaoying at 2014-11-24 09:49:22
换扩增酶试试高保真的可能在pcr时就自动修复了

也有这个可能，我用的是takara公司的ex hs 酶，您一般用什么酶呢

5楼2014-11-26 20:27:07

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