应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 定点突变测序结果居然没有突变上，什么原因
111/2返回列表12下一页
查看: 2626  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

1360548549

金虫 (初入文坛)

[交流] 定点突变测序结果居然没有突变上，什么原因 已有5人参与

我正在做定点突变，利用导师设计好的定点突变引物扩增后，dpn1酶解去除未点突变的模板，然后进行T载体连接转化（有设对照，对照未长），送去测序后，居然没有测到点突变，这是什么原因呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-11-23 20:28:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yingxiaoying

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-24 12:33:43
换扩增酶试试 高保真的可能在pcr时就自动修复了
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2014-11-24 09:49:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoyugutou

捐助贵宾 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
if your mutant is on primer, I guess its the problem of primer
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2014-11-26 05:58:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
定点突变用t载体？
赞一下 回复此楼
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
3楼2014-11-26 05:20:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1360548549

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yingxiaoying at 2014-11-24 09:49:22
换扩增酶试试 高保真的可能在pcr时就自动修复了

也有这个可能，我用的是takara公司的ex hs 酶，您一般用什么酶呢
赞一下 回复此楼
5楼2014-11-26 20:27:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1360548549

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2014-11-26 05:20:55
定点突变用t载体？

之前用的是mbp载体，连接T载体是测序用的；我是从重组的mbp载体上扩增目的片段，然后连接到T载体，送去测序，看我的目的片段有没有正确点突变，这个方法可行吗，您一般都怎么做呢
赞一下 回复此楼
6楼2014-11-26 20:29:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1360548549

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xiaoyugutou at 2014-11-26 05:58:43
if your mutant is on primer, I guess its the problem of primer

对哦，这个也有可能，但是我引物设计的时候确实是点突变的哇
赞一下 回复此楼
7楼2014-11-26 20:29:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

喜气洋洋

金虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
KOD plus 试试，另外适当提高点退火温度，57-60，试试

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
学海无涯懂做舟
8楼2014-11-26 23:04:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 1360548549 at 2014-11-26 00:29:11
之前用的是mbp载体，连接T载体是测序用的；我是从重组的mbp载体上扩增目的片段，然后连接到T载体，送去测序，看我的目的片段有没有正确点突变，这个方法可行吗，您一般都怎么做呢...

哦，我只是觉得直接可以用mbp载体测序，t载体比测序引物贵多了
赞一下 回复此楼
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
9楼2014-11-26 23:27:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuzhu598

铁虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-27 20:03:54
引物没有问题的话应该就是模板的问题，建议模板少加一点！模板消化后不是直接纯化做transformation吗，怎么还要连到T载上！
赞一下 回复此楼
10楼2014-11-26 23:42:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 1360548549 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿哈工大，085400，320，求调剂 +4 gdlf9999 2026-03-24 4/200 2026-03-25 23:01 by boxking200
[考研] 材料与化工328分调剂 +6 。，。，。，。i 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:30 by 418490947
[考研] 289求调剂 +14 硕星赴 2026-03-23 14/700 2026-03-25 22:22 by 544594351
[考研] 08工学调剂 +13 用户573181 2026-03-20 18/900 2026-03-25 22:00 by zbssa
[考研] 【2026考研调剂】制药工程 284分 求相关专业调剂名额 +4 袁奂奂 2026-03-25 8/400 2026-03-25 14:32 by lbsjt
[考研] 材料与化工考研调剂 +9 孅華 2026-03-22 9/450 2026-03-25 13:09 by cmz0325
[考研] 284求调剂 +15 Zhao anqi 2026-03-22 15/750 2026-03-25 12:51 by wht0531
[考研] 303求调剂 +6 元夕元 2026-03-20 7/350 2026-03-25 12:00 by edmund7
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +4 13831862839 2026-03-24 5/250 2026-03-25 09:47 by 无际的草原
[考研] 0854 考研调剂 招生了！AI 方向 +5 pk3725069 2026-03-19 17/850 2026-03-24 17:30 by zhouxuan..
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +10 纸鱼ly 2026-03-21 11/550 2026-03-24 17:22 by qingfeng258
[考研] 求调剂 +6 研研，接电话 2026-03-24 7/350 2026-03-24 17:01 by barlinike
[考研] 305分求调剂（食品工程） +5 Sxy112 2026-03-21 7/350 2026-03-24 12:27 by 544594351
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[考研] 293求调剂 +3 涛涛Wjt 2026-03-22 5/250 2026-03-22 22:21 by jiangpengfei
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
[基金申请] 学校已经提交到NSFC，还能修改吗？ 40+4 babangida 2026-03-19 9/450 2026-03-21 16:12 by babangida
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 12/600 2026-03-20 12:25 by lidianxing
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭