应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 定点突变测序结果居然没有突变上，什么原因
111/2返回列表12下一页
查看: 2819  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

1360548549

金虫 (初入文坛)

[交流] 定点突变测序结果居然没有突变上，什么原因 已有5人参与

我正在做定点突变，利用导师设计好的定点突变引物扩增后，dpn1酶解去除未点突变的模板，然后进行T载体连接转化（有设对照，对照未长），送去测序后，居然没有测到点突变，这是什么原因呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-11-23 20:28:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yingxiaoying

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-24 12:33:43
换扩增酶试试 高保真的可能在pcr时就自动修复了
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2014-11-24 09:49:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoyugutou

捐助贵宾 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
if your mutant is on primer, I guess its the problem of primer
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2014-11-26 05:58:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
定点突变用t载体？
赞一下 回复此楼
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
3楼2014-11-26 05:20:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1360548549

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yingxiaoying at 2014-11-24 09:49:22
换扩增酶试试 高保真的可能在pcr时就自动修复了

也有这个可能，我用的是takara公司的ex hs 酶，您一般用什么酶呢
赞一下 回复此楼
5楼2014-11-26 20:27:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1360548549

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2014-11-26 05:20:55
定点突变用t载体？

之前用的是mbp载体，连接T载体是测序用的；我是从重组的mbp载体上扩增目的片段，然后连接到T载体，送去测序，看我的目的片段有没有正确点突变，这个方法可行吗，您一般都怎么做呢
赞一下 回复此楼
6楼2014-11-26 20:29:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1360548549

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xiaoyugutou at 2014-11-26 05:58:43
if your mutant is on primer, I guess its the problem of primer

对哦，这个也有可能，但是我引物设计的时候确实是点突变的哇
赞一下 回复此楼
7楼2014-11-26 20:29:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

喜气洋洋

金虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
KOD plus 试试，另外适当提高点退火温度，57-60，试试

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
学海无涯懂做舟
8楼2014-11-26 23:04:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 1360548549 at 2014-11-26 00:29:11
之前用的是mbp载体，连接T载体是测序用的；我是从重组的mbp载体上扩增目的片段，然后连接到T载体，送去测序，看我的目的片段有没有正确点突变，这个方法可行吗，您一般都怎么做呢...

哦，我只是觉得直接可以用mbp载体测序，t载体比测序引物贵多了
赞一下 回复此楼
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
9楼2014-11-26 23:27:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuzhu598

铁虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-27 20:03:54
引物没有问题的话应该就是模板的问题，建议模板少加一点！模板消化后不是直接纯化做transformation吗，怎么还要连到T载上！
赞一下 回复此楼
10楼2014-11-26 23:42:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 1360548549 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +6 德尚中行 2026-08-27 7/350 2026-08-30 12:53 by Bxndjjd
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +3 雨打竹帘 2026-08-30 4/200 2026-08-30 12:35 by 白大多亮
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-30 11:52 by l0VvVHGBGRLv
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-30 11:41 by l0VvVHGBGRLv
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-30 11:10 by l0VvVHGBGRLv
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-30 06:55 by ZPa0EcMwuECS
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 8/400 2026-08-30 05:48 by ZPa0EcMwuECS
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 11/550 2026-08-30 05:40 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 01:45 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 国社科申报系统有变化 +3 kynobel 2026-08-23 3/150 2026-08-29 21:57 by 余韵清
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +9 苏东坡二世 2026-08-23 9/450 2026-08-29 14:41 by hustersqt
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭