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muyuchc

木虫 (小有名气)

[求助] western抗体是怎么识别蛋白一级序列的 已有7人参与

有的western抗体是识别蛋白一级序列的，请问是怎么特异性识别的？
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1楼 2014-11-18 19:38:16
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

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引用回帖:
7楼: Originally posted by muyuchc at 2014-11-20 11:10:43
谢谢，我说的识别一级序列，是抗体怎么去特异性识别一级序列的，不是它的氨基酸序列，当然上面你也说了，识别一级序列不会有很好的特异性。...

抗体本身就是i一级序列制备，所以跟一级序列匹配。至于识别过程，蛋白质互作。实质上是匹配抗原表位与抗体超变区中抗原结合点之间的结合。由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系，所以可以识别
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天行健
8楼2014-11-20 11:17:09
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xiaoyugutou

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【答案】应助回帖

★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-11-19 08:22:30
Maybe when they make antibody they immuned animals with peptides, so the antibody can recognize the primary sequence of protein as an antigen.
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2楼2014-11-19 06:07:14
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muyuchc

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaoyugutou at 2014-11-19 06:07:14
Maybe when they make antibody they immuned animals with peptides, so the antibody can recognize the primary sequence of protein as an antigen.

这个清楚，有没有具体的原理去识别的一级序列？
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3楼2014-11-19 10:06:51
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youlinglyw

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一匡天下

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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muyuchc: 金币+10 2014-11-20 19:17:01
大多数情况下，抗体的制备是通过一级序列去制备的。

简单的回顾下抗体的制备方法
1构建表达载体
2原核表达
3纯化蛋白
4免疫动物制备抗体

发现没，经过1,2,3步骤，这是原核表达步骤，原核表达的蛋白
1没有活性，
2多肽为主。

因为原核表达的蛋白
1缺乏真核表达所需要的酶，所以无法正确折叠成蛋白
2缺乏真核表达所需要的内环境，细胞器等
3原核表达以包涵体表达为主，所以，经过那么强烈的ph变化和尿素处理最后纯化出来的蛋白，有活性才怪，基本上就是条肽链

那么，以上问题解决了，答案就很明显了，你用的一级序列去制备抗体，那么抗体能够识别的， 自然是一级序列了

然后问题来了，这种情况下，事实上，抗体是不特异的。所以，极少见那些可以用自己制备抗体做出非常单一漂亮的wb图片的
所以，如何解决？单克隆抗体嘿嘿，牛一点咋办，直接从生物里提取活的抗体，那样最有用，生化危机啦，猿星崛起啦，都是这么干的。
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天行健
4楼2014-11-19 10:42:55
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