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xiaonan_1989

金虫 (小有名气)

[求助] 新手,求解双向电泳图像分析 已有2人参与

最近开始做双向电泳,总是做不好,求大神给分析一下原因。我的样品是从细胞中提取的,裂解液是8M尿素,2%CHAPS,2%IPG Buffer,0.002%溴酚蓝,40mMDTT,水化液是8M尿素,2%CHAPS,0.5%IPG Buffer,0.002%溴酚蓝,1%DTT。总上样体积是500ul。2跟胶条,pH3-10的,GE的。等电聚焦程序是0V,8h,30V,12h,500V,1h,1000V,1h,8000V,40KVh,电流最后是32uA。然后平衡30min,第二向跑了大概4h。然后染色3h,过夜脱色。凝胶是过夜凝的,估计没怎么凝好。

新手,求解双向电泳图像分析
20141106-c_副本.jpg


新手,求解双向电泳图像分析-1
20141106-tt_副本.jpg
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haze12344

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感觉横纹竖纹好多,DTT是预先加的还是现用现加?
生物你好
2楼2015-02-02 10:48:15
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guxinhan123

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-02-03 11:28:13
优化下蛋白提取程序,试下2d clean kit或者沉淀下蛋白。胶条长度是多少,最后聚焦的总量不是太够
3楼2015-02-02 13:39:48
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