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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 关于发酵罐培养基灭菌问题
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qcq019

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于发酵罐培养基灭菌问题 已有10人参与

培养基总体积约3000L，其中玉米粉+豆粕+糖+无机盐占比约5%。投入液体发酵罐进行实消，温度122-125℃，在灭菌操作没有失误的情况下，为什么会出现少数实消不彻底的批次？
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发酵
1楼 2014-11-02 22:01:11
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qcq019

新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by sunqingfeng1 at 2014-11-02 22:59:52
少数，少到什么程度，千分之一是正常的。也有可能有死角，建议碱消。

谢谢解答。本月做了三罐，全部染了，更换了滤芯，对发酵罐做了整体，彻底清洗，目前培养24小时暂时没有问题

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发酵
7楼2014-11-03 10:06:35
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新虫 (初入文坛)
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3楼: Originally posted by 树2979 at 2014-11-03 02:29:59
排空关太紧了～蒸汽可以开大一点，排空开大一点，让液面翻腾厉害一点，所有的管道，非进汽则必须出气，这样即可

谢谢。在上次染菌后，减少了培养基装量，实消时三路蒸汽开度较以往都大，培养基剧烈翻滚，但是降温到30℃时取样仍然染菌。空气滤芯新更换，事后检查没有发现脓疱，发酵罐气密性良好。

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发酵
8楼2014-11-03 10:13:18
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新虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by korchagin at 2014-11-03 08:43:59
培养的时候是不是有泡沫从排气口喷出，如果有，这样也容易染菌

谢谢。灭菌及培养过程中没有起泡，更不会逃逸，应该不是这个问题

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发酵
9楼2014-11-03 10:15:01
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新虫 (初入文坛)
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5楼: Originally posted by s156769699 at 2014-11-03 09:27:54
浓度太高，可能结团，就灭不死

谢谢。原料配比一直没有更改，结团与形成脓疱的可能性小，估计还是别的原因。

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发酵
10楼2014-11-03 10:18:57
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新虫 (初入文坛)
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6楼: Originally posted by xuzhide at 2014-11-03 09:56:47
灭菌时间和原料的新鲜程度。

谢谢。可能是这个原因，这次对原料进行了处理，灭菌时间也相应加长，目前培养12h还没有问题

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发酵
11楼2014-11-03 10:21:29
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新虫 (初入文坛)
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12楼: Originally posted by boysil at 2014-11-03 11:09:14
大概的污染时间是什么时候？

以温度降至30℃开始计算，染菌时间分别为0h，24h，72h

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发酵
13楼2014-11-03 11:14:05
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新虫 (初入文坛)
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16楼: Originally posted by 树2979 at 2014-11-03 15:52:54
灭完菌在降温的过程中不是要保持一定的罐压么？最好能保持在0.03~0.05Mpa之间，待降温至37摄氏度以下取无菌样做平板涂布和液体培养，看看情况如何！同时，建议对空间地板以及钢平台等每天固定时间不同消毒液进行消 ...

降温及培养过程中没有罐压跌零的情况，在排除其他可能的情况下，目前最可疑的是死角及实消不彻底。根据降完温后取样涂平板染菌的情况，我更怀疑是实消不彻底。现在正在空培，36h正常，感觉到希望了！

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发酵
17楼2014-11-03 17:45:39
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新虫 (初入文坛)
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15楼: Originally posted by 愤怒的家雀 at 2014-11-03 12:02:02
有没有做渗漏测试？...

做过了，关键部位不存在渗漏，可能还是实消的问题

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发酵
18楼2014-11-03 17:47:24
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