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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 转染（transformation）失败，不长菌落
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smilentless

铜虫 (初入文坛)

[求助] 转染（transformation）失败，不长菌落 已有1人参与

我想扩增pUc19，用的是XL1-Blue细胞，转染的pUc19DNA（0.1ng/μl），固体培养基是自制LB-amp培养基，37℃16h培养，操作均没问题，只是中间有步42℃45s的水浴锅加热到43℃了，不知道是不是这个问题。
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1楼 2014-10-18 11:39:42
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s_lich28

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
smilentless: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-10-20 08:24:48
引用回帖:
3楼: Originally posted by smilentless at 2014-10-19 12:45:55
排除感受能力问题要做一个pUC18的positive control（pUC18 DNA应该在XL1-Blue的kit里有附带） 是什么意思额，求教...

就是因为大肠杆菌本身的问题质粒DNA没法进入细菌，或者进入后不表达，所以需要有一个阳性对照（意思是用随kit附带的质粒DNA去转染的话如果大肠杆菌本身没问题的话那肯定能长出菌落），以此来判断大肠杆菌本身有没有问题。
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There is nothing either good or bad, thinking makes it so.
4楼2014-10-19 14:55:14
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s_lich28

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
smilentless: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-10-19 11:46:18
43度水浴不是问题，建议楼主同时做一个pUC18的positive control（pUC18 DNA应该在XL1-Blue的kit里有附带），排除菌体competent能力的问题。或者可以换一个competent菌株试试，同样可以排除XL1-Blue本身的问题。
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There is nothing either good or bad, thinking makes it so.
2楼2014-10-18 22:02:16
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smilentless

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by s_lich28 at 2014-10-18 22:02:16
43度水浴不是问题，建议楼主同时做一个pUC18的positive control（pUC18 DNA应该在XL1-Blue的kit里有附带），排除菌体competent能力的问题。或者可以换一个competent菌株试试，同样可以排除XL1-Blue本身的问题。

排除感受能力问题要做一个pUC18的positive control（pUC18 DNA应该在XL1-Blue的kit里有附带） 是什么意思额，求教
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3楼2014-10-19 11:45:55
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smilentless

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by s_lich28 at 2014-10-19 14:55:14
就是因为大肠杆菌本身的问题质粒DNA没法进入细菌，或者进入后不表达，所以需要有一个阳性对照（意思是用随kit附带的质粒DNA去转染的话如果大肠杆菌本身没问题的话那肯定能长出菌落），以此来判断大肠杆菌本身有没有 ...

非常感谢，下次有问题希望还能向你请教
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5楼2014-10-20 08:25:29
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