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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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smilentless

铜虫 (初入文坛)

[求助] 转染(transformation)失败,不长菌落 已有1人参与

我想扩增pUc19,用的是XL1-Blue细胞,转染的pUc19DNA(0.1ng/μl),固体培养基是自制LB-amp培养基,37℃16h培养,操作均没问题,只是中间有步42℃45s的水浴锅加热到43℃了,不知道是不是这个问题。
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s_lich28

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
smilentless: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-10-19 11:46:18
43度水浴不是问题,建议楼主同时做一个pUC18的positive control(pUC18 DNA应该在XL1-Blue的kit里有附带),排除菌体competent能力的问题。或者可以换一个competent菌株试试,同样可以排除XL1-Blue本身的问题。
There is nothing either good or bad, thinking makes it so.
2楼2014-10-18 22:02:16
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smilentless

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by s_lich28 at 2014-10-18 22:02:16
43度水浴不是问题,建议楼主同时做一个pUC18的positive control(pUC18 DNA应该在XL1-Blue的kit里有附带),排除菌体competent能力的问题。或者可以换一个competent菌株试试,同样可以排除XL1-Blue本身的问题。

排除感受能力问题要做一个pUC18的positive control(pUC18 DNA应该在XL1-Blue的kit里有附带) 是什么意思额,求教
3楼2014-10-19 11:45:55
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s_lich28

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
smilentless: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-10-20 08:24:48
引用回帖:
3楼: Originally posted by smilentless at 2014-10-19 12:45:55
排除感受能力问题要做一个pUC18的positive control(pUC18 DNA应该在XL1-Blue的kit里有附带) 是什么意思额,求教...

就是因为大肠杆菌本身的问题质粒DNA没法进入细菌,或者进入后不表达,所以需要有一个阳性对照(意思是用随kit附带的质粒DNA去转染的话如果大肠杆菌本身没问题的话那肯定能长出菌落),以此来判断大肠杆菌本身有没有问题。
There is nothing either good or bad, thinking makes it so.
4楼2014-10-19 14:55:14
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smilentless

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by s_lich28 at 2014-10-19 14:55:14
就是因为大肠杆菌本身的问题质粒DNA没法进入细菌,或者进入后不表达,所以需要有一个阳性对照(意思是用随kit附带的质粒DNA去转染的话如果大肠杆菌本身没问题的话那肯定能长出菌落),以此来判断大肠杆菌本身有没有 ...

非常感谢,下次有问题希望还能向你请教
5楼2014-10-20 08:25:29
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