应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 转染（transformation）失败，不长菌落
51/1返回列表
查看: 3136  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

smilentless

铜虫 (初入文坛)

[求助] 转染（transformation）失败，不长菌落 已有1人参与

我想扩增pUc19，用的是XL1-Blue细胞，转染的pUc19DNA（0.1ng/μl），固体培养基是自制LB-amp培养基，37℃16h培养，操作均没问题，只是中间有步42℃45s的水浴锅加热到43℃了，不知道是不是这个问题。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-10-18 11:39:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

s_lich28

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
smilentless: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-10-19 11:46:18
43度水浴不是问题，建议楼主同时做一个pUC18的positive control（pUC18 DNA应该在XL1-Blue的kit里有附带），排除菌体competent能力的问题。或者可以换一个competent菌株试试，同样可以排除XL1-Blue本身的问题。
赞一下 回复此楼
There is nothing either good or bad, thinking makes it so.
2楼2014-10-18 22:02:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smilentless

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by s_lich28 at 2014-10-18 22:02:16
43度水浴不是问题，建议楼主同时做一个pUC18的positive control（pUC18 DNA应该在XL1-Blue的kit里有附带），排除菌体competent能力的问题。或者可以换一个competent菌株试试，同样可以排除XL1-Blue本身的问题。

排除感受能力问题要做一个pUC18的positive control（pUC18 DNA应该在XL1-Blue的kit里有附带） 是什么意思额，求教
赞一下 回复此楼
3楼2014-10-19 11:45:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

s_lich28

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
smilentless: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-10-20 08:24:48
引用回帖:
3楼: Originally posted by smilentless at 2014-10-19 12:45:55
排除感受能力问题要做一个pUC18的positive control（pUC18 DNA应该在XL1-Blue的kit里有附带） 是什么意思额，求教...

就是因为大肠杆菌本身的问题质粒DNA没法进入细菌，或者进入后不表达，所以需要有一个阳性对照（意思是用随kit附带的质粒DNA去转染的话如果大肠杆菌本身没问题的话那肯定能长出菌落），以此来判断大肠杆菌本身有没有问题。
赞一下 回复此楼
There is nothing either good or bad, thinking makes it so.
4楼2014-10-19 14:55:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smilentless

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by s_lich28 at 2014-10-19 14:55:14
就是因为大肠杆菌本身的问题质粒DNA没法进入细菌，或者进入后不表达，所以需要有一个阳性对照（意思是用随kit附带的质粒DNA去转染的话如果大肠杆菌本身没问题的话那肯定能长出菌落），以此来判断大肠杆菌本身有没有 ...

非常感谢，下次有问题希望还能向你请教
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2014-10-20 08:25:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 smilentless 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +3 5lbyq5wrhb 2026-02-07 4/200 2026-02-08 08:47 by vs90ilomwc
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +3 5lbyq5wrhb 2026-02-07 4/200 2026-02-08 08:46 by vs90ilomwc
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +3 3rkserf6qr 2026-02-07 5/250 2026-02-08 08:32 by vs90ilomwc
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +3 3rkserf6qr 2026-02-07 4/200 2026-02-08 08:27 by vs90ilomwc
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +5 2h7du0nuhk 2026-02-07 6/300 2026-02-08 08:26 by vs90ilomwc
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +5 2h7du0nuhk 2026-02-07 6/300 2026-02-08 08:12 by vs90ilomwc
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 6/300 2026-02-08 08:07 by vs90ilomwc
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 7/350 2026-02-08 08:06 by vs90ilomwc
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 7/350 2026-02-08 07:52 by vs90ilomwc
[找工作] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 7/350 2026-02-08 07:46 by vs90ilomwc
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 8/400 2026-02-08 07:27 by vs90ilomwc
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 8/400 2026-02-08 07:26 by vs90ilomwc
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 8/400 2026-02-08 07:07 by vs90ilomwc
[硕博家园] 博士延得我，科研能力直往上蹿 +8 偏振片 2026-02-02 8/400 2026-02-08 06:52 by liyeqik
[教师之家] 有院领导为了换新车，用横向课题经费买了俩车 +7 瞬息宇宙 2026-02-04 7/350 2026-02-07 21:47 by tfang
[有机交流] 酰胺脱乙酰基 10+5 chibby 2026-02-03 12/600 2026-02-07 19:29 by 江东闲人
[基金申请] 同年申请2项不同项目，第1个项目里不写第2个项目的信息，可以吗 +4 hitsdu 2026-02-06 4/200 2026-02-07 13:07 by jurkat.1640
[基金申请] 有时候真觉得大城市人没有县城人甚至个体户幸福 +9 苏东坡二世 2026-02-04 10/500 2026-02-07 12:37 by 小毛球
[考博] 天津大学招2026.09的博士生，欢迎大家推荐交流（博导是本人） +4 a793625982 2026-02-05 5/250 2026-02-07 10:57 by a793625982
[基金申请] 面上项目申报 +3 Tide man 2026-02-01 3/150 2026-02-05 22:56 by god_tian
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭