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shiliyusly

新虫 (小有名气)

[求助] 氨苄平板长杂菌 已有3人参与

大家好,最近我做克隆有个问题想请教下大家。
我做RACE克隆用的感受态买的天根的,开始几次做氨苄平板好几次长杂菌,白茫茫一片,我怀疑是氨苄失活,所以重新配氨苄,重新涂平板,杂菌就不长了!现在我就是配氨苄直接分装成150ul -20度冻存,用的时候一次性用完,加入培养基时更是等到冷到快凝固的时候,因此应该不会存在氨苄失活问题。

昨天我用相同方法做5个基因的氨苄平板,感受态是刚开始买同一包天根的剩下的3支。同时帮顺便同学做他6个基因,但是感受态是用的他的takara的,其他倒的平板,转化载体,其他实验步骤完全一致,并且同时进行。可最后我的5个基因平板全是长杂菌的白茫茫的,他的6个基因全是长的单个菌落,没有杂菌。我和他的全是33ul感受态转化一个基因。
难道是我买的天根感受态有问题?可是同一包装的其他几管都没问题啊???
大家怎么看???
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zep616745243

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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shiliyusly(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-27 21:54:35
shiliyusly: 金币+2 2014-04-28 14:13:04
转一个空感受态组试试吧,同一个批次的感受态稳定性问题应该不大
只有不断地失败才会成功
2楼2014-04-27 15:51:44
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孤野知—少帅

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-28 10:36:18
shiliyusly: 金币+1 2014-04-28 14:13:13
引用回帖:
2楼: Originally posted by zep616745243 at 2014-04-27 15:51:44
转一个空感受态组试试吧,同一个批次的感受态稳定性问题应该不大

转空感受态组?你是指直接突变感受态?感受态没抗性,这样也检测不出来吧。倒不如用takara的转化一下试一试
孤野知
3楼2014-04-27 22:30:46
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shiliyusly

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 孤野知—少帅 at 2014-04-27 22:30:46
转空感受态组?你是指直接突变感受态?感受态没抗性,这样也检测不出来吧。倒不如用takara的转化一下试一试...

今天用其他实验室现成的平板用剩下的菌液又涂了平板,结果长的又很好了!!!难道是我做平板的问题,氨苄绝对是没问题的,还会哪里有问题呢???
4楼2014-04-27 23:04:06
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393658000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-28 10:36:25
AMP 很容易失活的,而且你要是长一片应该就是抗性失效了,你可以用羧苄试试,虽然贵一些,但是效果好很多。
5楼2014-04-28 08:45:37
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-28 10:36:31
AMP零下20度很稳定的,4度也能放半个月没有问题,多半是你的感受态的问题
6楼2014-04-28 09:12:14
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zep616745243

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 孤野知—少帅 at 2014-04-27 22:30:46
转空感受态组?你是指直接突变感受态?感受态没抗性,这样也检测不出来吧。倒不如用takara的转化一下试一试...

对啊,万一是你的空感受态本身含有抗性质粒呢?试验初次试验最好做下对照,以便出问题时检查,我的氨苄一般50度以下加都木有问题
只有不断地失败才会成功
7楼2014-04-28 09:39:53
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shiliyusly

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by ganchao1776 at 2014-04-28 09:12:14
AMP零下20度很稳定的,4度也能放半个月没有问题,多半是你的感受态的问题

可是我用多余的菌液涂其他实验室做好的平板,菌长的又挺好呢,那就应该不是感受态问题
8楼2014-04-28 14:12:09
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