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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 氨苄平板长杂菌
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shiliyusly

新虫 (小有名气)

[求助] 氨苄平板长杂菌 已有3人参与

大家好，最近我做克隆有个问题想请教下大家。
我做RACE克隆用的感受态买的天根的，开始几次做氨苄平板好几次长杂菌，白茫茫一片，我怀疑是氨苄失活，所以重新配氨苄，重新涂平板，杂菌就不长了！现在我就是配氨苄直接分装成150ul -20度冻存，用的时候一次性用完，加入培养基时更是等到冷到快凝固的时候，因此应该不会存在氨苄失活问题。

昨天我用相同方法做5个基因的氨苄平板，感受态是刚开始买同一包天根的剩下的3支。同时帮顺便同学做他6个基因，但是感受态是用的他的takara的，其他倒的平板，转化载体，其他实验步骤完全一致，并且同时进行。可最后我的5个基因平板全是长杂菌的白茫茫的，他的6个基因全是长的单个菌落，没有杂菌。我和他的全是33ul感受态转化一个基因。
难道是我买的天根感受态有问题？可是同一包装的其他几管都没问题啊???
大家怎么看？？？
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1楼 2014-04-27 15:38:43
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393658000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-28 10:36:25
AMP 很容易失活的，而且你要是长一片应该就是抗性失效了，你可以用羧苄试试，虽然贵一些，但是效果好很多。
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5楼2014-04-28 08:45:37
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zep616745243

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
shiliyusly(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-27 21:54:35
shiliyusly: 金币+2 2014-04-28 14:13:04
转一个空感受态组试试吧，同一个批次的感受态稳定性问题应该不大
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只有不断地失败才会成功
2楼2014-04-27 15:51:44
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孤野知—少帅

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-28 10:36:18
shiliyusly: 金币+1 2014-04-28 14:13:13
引用回帖:
2楼: Originally posted by zep616745243 at 2014-04-27 15:51:44
转一个空感受态组试试吧，同一个批次的感受态稳定性问题应该不大

转空感受态组？你是指直接突变感受态？感受态没抗性，这样也检测不出来吧。倒不如用takara的转化一下试一试
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孤野知
3楼2014-04-27 22:30:46
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shiliyusly

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 孤野知—少帅 at 2014-04-27 22:30:46
转空感受态组？你是指直接突变感受态？感受态没抗性，这样也检测不出来吧。倒不如用takara的转化一下试一试...

今天用其他实验室现成的平板用剩下的菌液又涂了平板，结果长的又很好了！！！难道是我做平板的问题，氨苄绝对是没问题的，还会哪里有问题呢？？？
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4楼2014-04-27 23:04:06
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