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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 真菌培养总长杂菌怎么办
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ayao-zy

新虫 (初入文坛)

[求助] 真菌培养总长杂菌怎么办

我做的是课题是植物提取物抑制真菌生长的，但是用PDA培养真菌时总长杂菌，黑色和绿色的小菌落，可能是细菌污染，分析了各种可能还是解决不了，并且对照不加药剂的平板一般不长杂菌，加了药剂的疯狂的长杂菌，这到底是什么情况，求高手指点。
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1楼2012-02-10 15:56:29
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jiyannangxj

至尊木虫 (著名写手)

美女搞科研

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主，这个问题其实很简单的，我就是做真菌培养发酵的，你说的问题不太清楚，我分条回答：1、如果实验组还没加植物提取物，就已经长杂菌了，对照组没长杂菌，可以得出，你平板灭菌和倒平板没问题，问题可能出现在药剂中含有杂菌，不过你说长的是黑色和绿色的杂菌，你应该观察一下菌落形态，如果菌落直径小，表面为油乎乎的，这才是细菌污染，不过我个人经验判断这种情况应该没有才对，黑色和绿色的杂菌应该是真菌才对，因为你做的是植物提取物抑制真菌生长，首先你得先培养出目标真菌，而药剂是防止PDA培养基中长细菌的，原理是破坏细菌细胞壁中的肽聚糖的合成。所以这种药剂对真菌是不起作用的，真菌细胞壁中没有肽聚糖，所以，你污染的杂菌就是真菌。不会是细菌污染。
2、对于药剂中有真菌污染的情况，你可以选择无菌滤膜过滤，这个一般是过滤细菌的，但真菌的菌体比细菌大，也能过滤真菌。还有一种办法，如果你的药剂分子耐高温的话，干脆灭菌锅灭菌，不过我估计这种办法不太可行。所以建议用第一种办法。。
3、楼主既然选择了这个方向，就应该先学习一下，真菌和细菌的在培养方面应该注意的问题，其中最重要的就是操作规范问题，接种过程中很有可能污染杂菌的，即便是紫外杀菌了，染菌的可能性也很大。。。。
呵呵，共同学习吧。。。。。希望可以帮到你。。。
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10楼2012-02-27 10:02:52
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zdwxxw

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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amisking(金币+2): 鼓励发帖交流！ 2012-02-10 18:12:30
"不加药剂的平板一般不长杂菌，加了药剂的疯狂的长杂菌",显然你的药剂有问题或者加药剂的时候出了问题，想办法把药剂消消毒吧，过滤除菌也值得一试
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ayao-zy
踏踏实实做好自己，其他的事与你无关。
3楼2012-02-10 16:22:30
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zys1256

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
对比实验表明，应该是药剂污染了。想办法给药剂除菌
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4楼2012-02-11 08:44:32
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twisty

木虫 (正式写手)

newer

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
从你的描述看，可能染的杂菌既有真菌，也有细菌，最大可能是你操作不过关造成的。建议细菌染菌可用适量的抗生素来解决，真菌吗，你得小心操作了。多转几次后可以解决。
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兼并碱基M=A/CR=A/GW=A/TS=G/CY=C/TK=G/TV=A/G/C&n...
5楼2012-02-11 09:42:42
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wjf008

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流！ 2012-02-10 18:12:25
把你的药剂溶解后过一下0.45μm的膜就可以了，估计是药品有污染，或者操作不当造成的。
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2楼2012-02-10 16:10:01
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character

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
将你的药剂通用0.22μm的过滤膜过滤除菌后再添加。可以买到一次性过滤柱
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6楼2012-02-11 14:06:22
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ayao-zy

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by zdwxxw at 2012-02-10 16:22:30:
"不加药剂的平板一般不长杂菌，加了药剂的疯狂的长杂菌",显然你的药剂有问题或者加药剂的时候出了问题，想办法把药剂消消毒吧，过滤除菌也值得一试

感谢你的关注，我想可能是加药剂时的操作有问题吧，我不是微生物专业的，对这方面一点都不懂，请问那加药剂时要注意什么问题呢？
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7楼2012-02-13 09:16:45
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langfei16

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
“对照一般不长杂菌”，首先判断你的操作处理还是有一定的问题，建议：
1. 无菌操作要规范
2. 培养皿盖上的冷凝水要去除
3. 配母液和稀释液都在无菌操作台进行无菌操作，稀释时可加无菌水或液体PDA培养基
    具体原因要看你的具体操作来分析，如，你做的是含药平板还是涂布平板等，希望可以对你的实验有帮助，祝你实验顺利！
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把结果留给别人
8楼2012-02-13 10:06:49
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zdwxxw

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by ayao-zy at 2012-02-13 09:16:45:
感谢你的关注，我想可能是加药剂时的操作有问题吧，我不是微生物专业的，对这方面一点都不懂，请问那加药剂时要注意什么问题呢？

分别分析吧,
1.假设药剂里面有污染微生物，不处理药剂的话，那么无论你的操作多么规范，最后还是要长杂菌，所以第一步就是要过滤除菌（其实我觉得有90%以上的把握就是药剂污染的原因）。把你的药剂溶解（最好用无菌水）之后，在无菌条件下过0.22或0.45μm的滤膜（要用到滤菌器），收集到已灭菌的容器中备用。
2.既然对照不长杂菌，我想你的无菌操作应该还可以，也没有什么值得注意的。加药剂时的操作，把固体培养基溶解，冷却至70-80℃之间加药剂混匀，冷却至60℃左右倒平板（也可以冷却至60℃再加药剂混匀后直接倒平板，这个主要看你实验的经验了，总之不要太冷了再加试剂，防止凝固，尽量不要多次融化固体培养基）。其他的操作和对照组就一样了，希望对你有所帮助。祝你实验顺利！
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踏踏实实做好自己，其他的事与你无关。
9楼2012-02-13 10:50:23
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