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[求助]
真菌培养总长杂菌怎么办
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我做的是课题是植物提取物抑制真菌生长的，但是用PDA培养真菌时总长杂菌，黑色和绿色的小菌落，可能是细菌污染，分析了各种可能还是解决不了，并且对照不加药剂的平板一般不长杂菌，加了药剂的疯狂的长杂菌，这到底是什么情况，求高手指点。 |
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jiyannangxj
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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楼主，这个问题其实很简单的，我就是做真菌培养发酵的，你说的问题不太清楚，我分条回答：1、如果实验组还没加植物提取物，就已经长杂菌了，对照组没长杂菌，可以得出，你平板灭菌和倒平板没问题，问题可能出现在药剂中含有杂菌，不过你说长的是黑色和绿色的杂菌，你应该观察一下菌落形态，如果菌落直径小，表面为油乎乎的，这才是细菌污染，不过我个人经验判断这种情况应该没有才对，黑色和绿色的杂菌应该是真菌才对，因为你做的是植物提取物抑制真菌生长，首先你得先培养出目标真菌，而药剂是防止PDA培养基中长细菌的，原理是破坏细菌细胞壁中的肽聚糖的合成。所以这种药剂对真菌是不起作用的，真菌细胞壁中没有肽聚糖，所以，你污染的杂菌就是真菌。不会是细菌污染。 2、对于药剂中有真菌污染的情况，你可以选择无菌滤膜过滤，这个一般是过滤细菌的，但真菌的菌体比细菌大，也能过滤真菌。还有一种办法，如果你的药剂分子耐高温的话，干脆灭菌锅灭菌，不过我估计这种办法不太可行。所以建议用第一种办法。。 3、楼主既然选择了这个方向，就应该先学习一下，真菌和细菌的在培养方面应该注意的问题，其中最重要的就是操作规范问题，接种过程中很有可能污染杂菌的，即便是紫外杀菌了，染菌的可能性也很大。。。。 呵呵，共同学习吧。。。。。希望可以帮到你。。。 |
10楼2012-02-27 10:02:52
ayao-zy
3楼2012-02-10 16:22:30
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4楼2012-02-11 08:44:32
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6楼2012-02-11 14:06:22
7楼2012-02-13 09:16:45
8楼2012-02-13 10:06:49
【答案】应助回帖
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分别分析吧, 1.假设药剂里面有污染微生物，不处理药剂的话，那么无论你的操作多么规范，最后还是要长杂菌，所以第一步就是要过滤除菌（其实我觉得有90%以上的把握就是药剂污染的原因）。把你的药剂溶解（最好用无菌水）之后，在无菌条件下过0.22或0.45μm的滤膜（要用到滤菌器），收集到已灭菌的容器中备用。 2.既然对照不长杂菌，我想你的无菌操作应该还可以，也没有什么值得注意的。加药剂时的操作，把固体培养基溶解，冷却至70-80℃之间加药剂混匀，冷却至60℃左右倒平板（也可以冷却至60℃再加药剂混匀后直接倒平板，这个主要看你实验的经验了，总之不要太冷了再加试剂，防止凝固，尽量不要多次融化固体培养基）。其他的操作和对照组就一样了，希望对你有所帮助。祝你实验顺利！ |
9楼2012-02-13 10:50:23
