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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 平板涂布不稳定，总是或涂不出菌，或没成梯度，或菌落摊开成膜状
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719140139

铁虫 (初入文坛)

[求助] 平板涂布不稳定，总是或涂不出菌，或没成梯度，或菌落摊开成膜状 已有2人参与

问题如题，求大虫解答小虫疑问
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1楼 2012-08-30 14:57:09
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回帖置顶 ( 共有1个 )

fenggou82

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2012-08-30 20:13:02
梯度涂吧

应该会有好的结果

你的是什么菌？
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lovemyfamilyforever
4楼2012-08-30 19:27:38
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little_Jimmy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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zhang8826857: 金币+3, 欢迎来微生物板块交流 2012-09-08 17:03:55
一下建议不知道是否有帮助1.检查培养基的制备，pH及成分比例是否符合。2.倒的平板最好是第二天使用，确认无染菌。3.建议预实验梯度使用-1至-7，每个梯度三个重复，在制备下一梯度菌悬液时用移液枪吸打三次，充分混匀。4.有条件接菌后使用封口膜将平板四周封上。5.因为细菌生长速度很快，要经常观察。
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我们都是小吉米
11楼2012-09-01 14:58:06
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little_Jimmy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by hotsauce at 2012-09-01 21:08:01
我也刚开始做青藏高原土壤微生物，培养基应该没问题，可是总是培养不出细菌。所以我怀疑是不是菌悬液有什么问题，我的做法是将冷冻在-20摄氏度的土壤在无菌操作台上分装入5mL离心管，后将离心管放入4摄氏度冰箱活化 ...

没有分离过极端微生物，有一些微生物在实验室的条件下是不可培养的，原来分离解冻土中的微生物时我一般是取土样后在室温活化24h后再培养。
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我们都是小吉米
14楼2012-09-01 23:52:24
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人胖无罪

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

基础液是否搅拌均匀，可以放摇床多摇会，梯度稀释多摇会，移液枪取液时多吸几次，平板涂抹时多换几个方向多涂会

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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25楼2013-09-24 16:26:05
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普通回帖

weiyasong

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
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zhang8826857: 金币+1, 欢迎来微生物板块交流 2012-09-08 17:04:04
可以先加菌液于平皿内，向平皿内倒入适宜温度的培养基，然后轻轻摇晃平皿，使其很合均匀。这样可以的，我以前做过……可以参考下
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2楼2012-08-30 17:00:28
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爱莫若月

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by weiyasong at 2012-08-30 17:00:28
可以先加菌液于平皿内，向平皿内倒入适宜温度的培养基，然后轻轻摇晃平皿，使其很合均匀。这样可以的，我以前做过……可以参考下

可以直接加菌液到培养基吗？再倒平板~
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3楼2012-08-30 18:07:37
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719140139

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by weiyasong at 2012-08-30 17:00:28
可以先加菌液于平皿内，向平皿内倒入适宜温度的培养基，然后轻轻摇晃平皿，使其很合均匀。这样可以的，我以前做过……可以参考下

额，我试过倒平皿，菌落在培养基内长得也是散开的，而且我那菌是好氧的
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5楼2012-08-30 19:38:36
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719140139

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by fenggou82 at 2012-08-30 19:27:38
梯度涂吧

应该会有好的结果

你的是什么菌？

是用的稀世涂布的，原先有时-8都长着有，也有-4都不长的。。。涂的是种芽孢杆菌，好氧的
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6楼2012-08-30 19:40:03
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wgy2007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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zhang8826857: 金币+1, 欢迎在本版块交流^_^ 2012-08-31 19:24:50
应该是梯度稀释时做的不好，菌分散的不好，所以做出的结果不稳定。原菌液或从斜面洗下的菌用玻璃珠或旋涡混合器使菌充分分散后再做梯度稀释，梯度稀释也要用旋涡混合器混匀后再涂板。涂板时每个梯度用一个涂布棒，最少做三个平行样，取平均值。
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7楼2012-08-31 10:25:38
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shawcat

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是分散不够啊，原样最好用玻璃珠要散后再进行梯度稀释啊~另外铺满整个平板的有没有镜检，是不是染菌了 啊~
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8楼2012-08-31 11:25:28
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719140139

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wgy2007 at 2012-08-31 10:25:38
应该是梯度稀释时做的不好，菌分散的不好，所以做出的结果不稳定。原菌液或从斜面洗下的菌用玻璃珠或旋涡混合器使菌充分分散后再做梯度稀释，梯度稀释也要用旋涡混合器混匀后再涂板。涂板时每个梯度用一个涂布棒，最 ...

嗯，谢谢，下一批这些方法都试一试
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9楼2012-09-01 10:50:10
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719140139

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by shawcat at 2012-08-31 11:25:28
是不是分散不够啊，原样最好用玻璃珠要散后再进行梯度稀释啊~另外铺满整个平板的有没有镜检，是不是染菌了 啊~

有时平板都不长的，染菌都是平皿放久的原因染的
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10楼2012-09-01 10:51:56
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