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我们都是小吉米

11楼2012-09-01 14:58:06

fliuyang

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涂布棒凉久一点，太热不行

12楼2012-09-01 16:14:12

hotsauce

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11楼: Originally posted by little_Jimmy at 2012-09-01 14:58:06
一下建议不知道是否有帮助1.检查培养基的制备，pH及成分比例是否符合。2.倒的平板最好是第二天使用，确认无染菌。3.建议预实验梯度使用-1至-7，每个梯度三个重复，在制备下一梯度菌悬液时用移液枪吸打三次，充分混匀 ...

我也刚开始做青藏高原土壤微生物，培养基应该没问题，可是总是培养不出细菌。所以我怀疑是不是菌悬液有什么问题，我的做法是将冷冻在-20摄氏度的土壤在无菌操作台上分装入5mL离心管，后将离心管放入4摄氏度冰箱活化24小时，最初的土壤悬液在振荡器上已120转每分钟振荡20分钟，制备其他梯度时因为试管太长，就还是在振荡器上振荡5分钟，其他无菌操作也没什么问题，求指导！

13楼2012-09-01 21:08:01

little_Jimmy

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13楼: Originally posted by hotsauce at 2012-09-01 21:08:01
我也刚开始做青藏高原土壤微生物，培养基应该没问题，可是总是培养不出细菌。所以我怀疑是不是菌悬液有什么问题，我的做法是将冷冻在-20摄氏度的土壤在无菌操作台上分装入5mL离心管，后将离心管放入4摄氏度冰箱活化 ...

没有分离过极端微生物，有一些微生物在实验室的条件下是不可培养的，原来分离解冻土中的微生物时我一般是取土样后在室温活化24h后再培养。

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我们都是小吉米

14楼2012-09-01 23:52:24

lovestrings

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如果计数结果是很重要的，推荐用玻璃珠涂布，这样就不会有一大片一大片菌膜出现了，也比较好数~~~

15楼2012-09-02 08:59:13

weiyasong

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15楼: Originally posted by lovestrings at 2012-09-02 08:59:13
如果计数结果是很重要的，推荐用玻璃珠涂布，这样就不会有一大片一大片菌膜出现了，也比较好数~~~

不好意思，“用玻璃珠涂布”不是太明白，还请详细告知，不胜感激！

16楼2012-09-02 09:37:12

huangtao253

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个人做此类实验有点点经验，可提供小些经验。首先最重要的当然是菌悬液的制备，一定要均匀，于是要求一定要确保做到混匀，可用涡旋混匀器或者玻璃棒剧烈搅打（需注意你的菌是否对此过于敏感）。然后是平板的制备，平板制备好以后要观察固体培养基的含水量，一般以表面看上去不是很干燥无龟裂现象为好，一定要有时间让培养基水分蒸发一部分，大概平板准备好以后可以用牛皮纸包起来放在培养箱里吸干水分。然后便是涂布，一定做到将菌悬液在培养基上涂干方可。注意一些细节，做出来的梯度是很明显的。希望能帮到你

17楼2012-09-02 09:49:20

lovestrings

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1.选取玻璃珠一般直径1mm-3mm，新的玻璃珠用稀盐酸浸泡，用纯水洗干净（也可用自来水），烘干，用三角瓶装好，灭菌。
2.移取菌液置于平皿中，将灭好菌的玻璃珠10颗左右，倒入平皿，顺时针摇晃几下，再逆时针摇晃几下，估计要均匀就可以了
3.将玻璃珠倒出来。
4.平皿培养。
转自newtime007
这个方法我自己用过，确实好用，涂布出来的效果很好，菌落每个都均匀分散开，计数很方便，但是如果你不需要计数，只是分离，这个方法就麻烦了点

18楼2012-09-02 10:04:42

weiyasong

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18楼: Originally posted by lovestrings at 2012-09-02 10:04:42
1.选取玻璃珠一般直径1mm-3mm，新的玻璃珠用稀盐酸浸泡，用纯水洗干净（也可用自来水），烘干，用三角瓶装好，灭菌。
2.移取菌液置于平皿中，将灭好菌的玻璃珠10颗左右，倒入平皿，顺时针摇晃几下，再逆时针摇晃几 ...

谢谢！

19楼2012-09-02 10:21:34

hotsauce

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14楼: Originally posted by little_Jimmy at 2012-09-01 23:52:24
没有分离过极端微生物，有一些微生物在实验室的条件下是不可培养的，原来分离解冻土中的微生物时我一般是取土样后在室温活化24h后再培养。...

你们的冻土保存方法是怎样的？也是-20摄氏度么？

20楼2012-09-03 16:29:34