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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 平板涂布不稳定，总是或涂不出菌，或没成梯度，或菌落摊开成膜状
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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little_Jimmy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+3, 欢迎来微生物板块交流 2012-09-08 17:03:55
一下建议不知道是否有帮助1.检查培养基的制备，pH及成分比例是否符合。2.倒的平板最好是第二天使用，确认无染菌。3.建议预实验梯度使用-1至-7，每个梯度三个重复，在制备下一梯度菌悬液时用移液枪吸打三次，充分混匀。4.有条件接菌后使用封口膜将平板四周封上。5.因为细菌生长速度很快，要经常观察。
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我们都是小吉米
11楼2012-09-01 14:58:06
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fliuyang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
涂布棒凉久一点，太热不行
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12楼2012-09-01 16:14:12
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hotsauce

金虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by little_Jimmy at 2012-09-01 14:58:06
一下建议不知道是否有帮助1.检查培养基的制备，pH及成分比例是否符合。2.倒的平板最好是第二天使用，确认无染菌。3.建议预实验梯度使用-1至-7，每个梯度三个重复，在制备下一梯度菌悬液时用移液枪吸打三次，充分混匀 ...

我也刚开始做青藏高原土壤微生物，培养基应该没问题，可是总是培养不出细菌。所以我怀疑是不是菌悬液有什么问题，我的做法是将冷冻在-20摄氏度的土壤在无菌操作台上分装入5mL离心管，后将离心管放入4摄氏度冰箱活化24小时，最初的土壤悬液在振荡器上已120转每分钟振荡20分钟，制备其他梯度时因为试管太长，就还是在振荡器上振荡5分钟，其他无菌操作也没什么问题，求指导！
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13楼2012-09-01 21:08:01
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little_Jimmy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by hotsauce at 2012-09-01 21:08:01
我也刚开始做青藏高原土壤微生物，培养基应该没问题，可是总是培养不出细菌。所以我怀疑是不是菌悬液有什么问题，我的做法是将冷冻在-20摄氏度的土壤在无菌操作台上分装入5mL离心管，后将离心管放入4摄氏度冰箱活化 ...

没有分离过极端微生物，有一些微生物在实验室的条件下是不可培养的，原来分离解冻土中的微生物时我一般是取土样后在室温活化24h后再培养。
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我们都是小吉米
14楼2012-09-01 23:52:24
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lovestrings

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果计数结果是很重要的，推荐用玻璃珠涂布，这样就不会有一大片一大片菌膜出现了，也比较好数~~~
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15楼2012-09-02 08:59:13
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weiyasong

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by lovestrings at 2012-09-02 08:59:13
如果计数结果是很重要的，推荐用玻璃珠涂布，这样就不会有一大片一大片菌膜出现了，也比较好数~~~

不好意思，“用玻璃珠涂布”不是太明白，还请详细告知，不胜感激！
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16楼2012-09-02 09:37:12
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huangtao253

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人做此类实验有点点经验，可提供小些经验。首先最重要的当然是菌悬液的制备，一定要均匀，于是要求一定要确保做到混匀，可用涡旋混匀器或者玻璃棒剧烈搅打（需注意你的菌是否对此过于敏感）。然后是平板的制备，平板制备好以后要观察固体培养基的含水量，一般以表面看上去不是很干燥无龟裂现象为好，一定要有时间让培养基水分蒸发一部分，大概平板准备好以后可以用牛皮纸包起来放在培养箱里吸干水分。然后便是涂布，一定做到将菌悬液在培养基上涂干方可。注意一些细节，做出来的梯度是很明显的。希望能帮到你
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17楼2012-09-02 09:49:20
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lovestrings

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1.选取玻璃珠一般直径1mm-3mm，新的玻璃珠用稀盐酸浸泡，用纯水洗干净（也可用自来水），烘干，用三角瓶装好，灭菌。
2.移取菌液置于平皿中，将灭好菌的玻璃珠10颗左右，倒入平皿，顺时针摇晃几下，再逆时针摇晃几下，估计要均匀就可以了
3.将玻璃珠倒出来。
4.平皿培养。
转自newtime007
这个方法我自己用过，确实好用，涂布出来的效果很好，菌落每个都均匀分散开，计数很方便，但是如果你不需要计数，只是分离，这个方法就麻烦了点
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18楼2012-09-02 10:04:42
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weiyasong

木虫 (著名写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by lovestrings at 2012-09-02 10:04:42
1.选取玻璃珠一般直径1mm-3mm，新的玻璃珠用稀盐酸浸泡，用纯水洗干净（也可用自来水），烘干，用三角瓶装好，灭菌。
2.移取菌液置于平皿中，将灭好菌的玻璃珠10颗左右，倒入平皿，顺时针摇晃几下，再逆时针摇晃几 ...

谢谢！
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19楼2012-09-02 10:21:34
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hotsauce

金虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by little_Jimmy at 2012-09-01 23:52:24
没有分离过极端微生物，有一些微生物在实验室的条件下是不可培养的，原来分离解冻土中的微生物时我一般是取土样后在室温活化24h后再培养。...

你们的冻土保存方法是怎样的？也是-20摄氏度么？
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20楼2012-09-03 16:29:34
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