| 查看: 15685 | 回复: 12 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
sadhappy新虫 (正式写手)
|
[交流]
qrt-pcr加cDNA的量，怎么加？ 已有6人参与
|
||
|
说明书如下，cDNA要加100ng，那么体积怎么算？ 如果反转录加的RNA总量是1μg,20μl体系。最后反转录的CDNA有多少？ 我看有的人说就加1μl,好像是稀释后加的，那么稀释的标准是什么啊？如何稀释 ![\"qrt-pcr加cDNA的量，怎么加？\"](\"https://muchongimg.xmcimg.com/data/bcs/2014/1018/w316h722882_1413591408_842.jpg#opennewwindow\") |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有222人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- qPCR每个孔加多少cDNA怎么确定
已经有3人回复
- 判断引物是否适合用于qRT-PCR
已经有4人回复
- 定量PCR 目的基因CT值比内参高
已经有3人回复
- 荧光定量PCR中，结果内参基因的CT值有，但是目的基因的CT值没有，怎么办
已经有20人回复
- real time PCR模板稀释问题
已经有4人回复
- 反转录的cDNA没问题，但是实时定量PCR却不行。内参扩不出来啊。
已经有8人回复
- 实时定量PCR的模板是mRNA还是cDNA好？
已经有6人回复
- RT-PCR, q-PCR, 和qRT-PCR的引物可以相同吗？
已经有3人回复
- 实时荧光定量pcr，cDNA的加入量会影响结果的准确度吗？
已经有24人回复
- 关于QRT-PCR样本处理
已经有4人回复
- 相对荧光定量cDNA的问题
已经有8人回复
- 新人做qRT-PCR 引物怎么设计？
已经有5人回复
- 求助：相对定量qRT-PCR，需要定量mRNA或者cDNA吗？
已经有4人回复
- qRTPCR内参基因是不是每次都要做
已经有10人回复
- qRT-PCR的数据处理问题，error bar应该怎么做？
已经有4人回复
- 有关RT-PCR模板RNA量的问题，请高手解答！！！
已经有16人回复
- 荧光定量PCR cDNA怎么定量啊？
已经有12人回复
- 小白请问，cDNA第一条链合成后如何做PCR了？
已经有5人回复
- 想问下在以cDNA为模板时，PCR的结果却是徒步 什么原因
已经有5人回复
- 【求助/交流】RNA质量与qRT-PCR
已经有13人回复
- 【求助/交流】qRT-PCR
已经有16人回复
- 【求助/交流】RNA的提取问题和qRT-PCR分析基因在不同时间的定量表达
已经有10人回复
- 【求助/交流】qRT-PCR需要做不加RT的对照吗？
已经有3人回复
- RT-PCR后的cDNA呢？
已经有17人回复
sadhappy
新虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 900.8
- 散金: 215
- 帖子: 390
- 在线: 94.3小时
- 虫号: 722882
- 注册: 2009-03-14
- 专业: 人类遗传学
5楼2014-10-20 08:26:22
2楼2014-10-18 10:38:26
刘芬玲
金虫 (初入文坛)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 1307.3
- 红花: 2
- 帖子: 45
- 在线: 313.9小时
- 虫号: 3074380
- 注册: 2014-03-20
- 性别: MM
- 专业: 炎症、感染与免疫
3楼2014-10-18 11:43:56
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-10-20 08:47:08
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-10-20 08:47:08
|
我不知道你用什么反转录体系。我看不到你的说明书。 我的理解是，反转录并不扩增。所以，通常我都是准备2000ng的RNA做反转录。RT之后，cDNA就当是2000ng。20ul的体系，1ul就是100ng。 楼上朋友们说反转录之后测cDNA浓度，似不妥。因为反转录体系里成分已经很复杂，有dNTP，酶，缓冲液，模板，RNA酶抑制剂，随机引物。这么复杂的成分，会影响浓度的测量。 至于最后用多少cDNA做PCR，这个要看你的实验目的是什么，目标基因的丰度，使用何种设备，何种PCR体系，等等。 我做过组织和细胞样品的mRNA水平检测，用Applied Biosystems 9600， Sybr Green。大部分的样品cDNA（如上制备）需要稀释100倍做qPCR，供你参考。 如果你以前没做过qRT－PCR（看起来是这样哈：），估计需要摸索一段时间才可能得到比较可信的数据。这个东西，说简单就简单，照说明书做，不很复杂；但要想做得好，得到可信、稳定的数据，有很多细节。真正做好还是要花点功夫的。祝你好运。 |
4楼2014-10-18 14:14:06
