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aounao

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 12.3
帖子: 11
在线: 38.2小时
虫号: 3070120
注册: 2014-03-16
专业: 林木遗传育种学

[求助] 求指导！要测序，长度为1500左右，是pcr产物直接测序好还是连接转化测序比较好？已有4人参与

是对一个细菌测序，测序结果就是用来做分析，是从各个地方取样来分析序列，分析dna的多样性，构建系统发育树等等，是直接用pcr产物测序好还是连接转化比较好？
如果用pcr产物测序的话，是不是必须要提取dna来跑pcr，因为之前测序是做的菌液pcr然后连接转化等等。
谢谢师兄师姐的知道！

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1楼2014-10-09 17:43:55

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

王冠傑

铁虫 (小有名气)

应助: 11 (小学生)
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帖子: 62
在线: 19小时
虫号: 2417175
注册: 2013-04-14
性别: GG
专业: 免疫遗传学

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-11-26 10:13:48

1500bp一般双向就能测出来，不知道您对于序列要求高不高，因为测序前50bp会存在不准确的情况。如果要求比较高的话建议构建克隆（建议您用PMD18-T，这个成功率较高，千万不要用PET）用通用引物测序，如果要求不高的话直接送PCR产物好了，这样省钱。通常质粒的成功率要比PCR产物高！当然送测之前做一个酶切鉴定就最好了。不鉴定也行，一般的测序公司都能根据测序结果分析出你的问题的，就是耽搁一些时间。