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aounao

新虫 (初入文坛)

[求助] 求指导!要测序,长度为1500左右,是pcr产物直接测序好还是连接转化测序比较好? 已有4人参与

是对一个细菌测序,测序结果就是用来做分析,是从各个地方取样来分析序列,分析dna的多样性,构建系统发育树等等,是直接用pcr产物测序好还是连接转化比较好?
如果用pcr产物测序的话,是不是必须要提取dna来跑pcr,因为之前测序是做的菌液pcr然后连接转化等等。
谢谢师兄师姐的知道!
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王冠傑

铁虫 (小有名气)

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-11-26 10:13:48
1500bp一般双向就能测出来,不知道您对于序列要求高不高,因为测序前50bp会存在不准确的情况。如果要求比较高的话建议构建克隆(建议您用PMD18-T,这个成功率较高,千万不要用PET)用通用引物测序,如果要求不高的话直接送PCR产物好了,这样省钱。通常质粒的成功率要比PCR产物高!当然送测之前做一个酶切鉴定就最好了。不鉴定也行,一般的测序公司都能根据测序结果分析出你的问题的,就是耽搁一些时间。
10楼2014-11-25 21:25:38
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aounao

新虫 (初入文坛)

怎么木有人。。。。
2楼2014-10-09 19:01:46
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Merrylegs

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 鼓励交流 2014-10-10 12:27:14
一般来说用质粒或含质粒的菌液测序,效果要比PCR测序好。
3楼2014-10-09 19:09:49
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aounao

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Merrylegs at 2014-10-09 19:09:49
一般来说用质粒或含质粒的菌液测序,效果要比PCR测序好。

谢谢你!
4楼2014-10-10 09:26:49
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