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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » QPCR的溶解曲线中的这种小峰是否是非特异性扩增？
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cyofxy

新虫 (初入文坛)

[求助] QPCR的溶解曲线中的这种小峰是否是非特异性扩增？ 已有4人参与

新人刚开始做qpcr，退火温度为58℃时，发现有一个目的基因的溶解曲线的主峰前面有一个小峰，把退火温度提高到60℃后仍然有一个小峰，其他基因没有这个情况。请教一下各位前辈，这种峰是反应了非特异性扩增么？这种情况是重新设计引物，还是先跑胶，明确是否有非特异性扩增后再考虑要不要重新设计引物？
谢谢各位啦！

这张是58℃：



这张是60℃：


再次感谢各位！

QPCR的溶解曲线中的这种小峰是否是非特异性扩增？
1.jpg


QPCR的溶解曲线中的这种小峰是否是非特异性扩增？-1
2.jpg
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1楼 2014-10-07 19:50:27
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hkj710

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
非特异峰不明显，很有可能是引物二聚体
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6楼2014-10-10 00:10:16
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-10-08 12:31:29
跑个琼脂糖电泳看看吧，上样量多些
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rainwater
2楼2014-10-08 08:44:22
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20084032134

银虫 (小有名气)
亲，问一下你用哪个型号的仪器做的呢？我最近用ABI7300在做，可是自动分析的软件不好使！
我看你的图感觉还是效果不是很好，可能引物不太好吧
赞一下 回复此楼
永不言弃
3楼2014-10-08 19:22:52
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cyofxy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 20084032134 at 2014-10-08 19:22:52
亲，问一下你用哪个型号的仪器做的呢？我最近用ABI7300在做，可是自动分析的软件不好使！
我看你的图感觉还是效果不是很好，可能引物不太好吧

也是abi的，具体型号没注意啊
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4楼2014-10-09 15:46:23
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