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a599209150

新虫 (初入文坛)

[求助] 提取肉类DNA 已有2人参与

曲拉通X-100（Triton X-100 ）可以作为肉类破膜剂吗？
可以的话具体用多大浓度，对PCR有没有影响？谢谢
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1楼 2014-09-28 17:35:27
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koujie1986

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 鼓励发帖积极交流。 2014-09-28 18:49:57
可以的，但是浓度要自己试了才晓得对后续试验有没有影响。我觉得你可以考虑市面上常见的鼠尾直接PCR试剂盒，无需提取基因组就可以直接裂解组织做PCR。里面的裂解体系比较稳定。只是这些试剂盒适用于快速检测，后续PCR的目的片段超过1Kb可能扩不出来。
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2楼2014-09-28 17:53:08
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a599209150

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by koujie1986 at 2014-09-28 17:53:08
可以的，但是浓度要自己试了才晓得对后续试验有没有影响。我觉得你可以考虑市面上常见的鼠尾直接PCR试剂盒，无需提取基因组就可以直接裂解组织做PCR。里面的裂解体系比较稳定。只是这些试剂盒适用于快速检测，后续P ...

我是想用曲拉通X-100破膜后，加蛋白酶K，提取出DNA后，进行等温检测，不知道这样可不可以？谢谢。
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3楼2014-09-29 08:08:53
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a599209150

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by koujie1986 at 2014-09-28 17:53:08
可以的，但是浓度要自己试了才晓得对后续试验有没有影响。我觉得你可以考虑市面上常见的鼠尾直接PCR试剂盒，无需提取基因组就可以直接裂解组织做PCR。里面的裂解体系比较稳定。只是这些试剂盒适用于快速检测，后续P ...

亲，俺提取的是羊肉的DNA，是否有快速简洁的方法啊
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4楼2014-09-29 09:54:28
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koujie1986

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-09-29 11:18:23
鼠尾胶原蛋白多一点，相对肉类 核酸含量也少一点。你想啊，难裂解的都可以直接裂解了做PCR，更何况容易裂解的。
Triton X-100破膜加蛋白酶裂解这个想法是可以的，只是Triton X-100的添加量要自己试一下，而且蛋白酶裂解完了以后要95度灭活。从我们实验室测试的结果来看，裂解产物添加到PCR体系中只要保证Triton X-100终浓度小于1%就可以了。
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5楼2014-09-29 10:12:32
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a599209150

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by koujie1986 at 2014-09-29 10:12:32
鼠尾胶原蛋白多一点，相对肉类 核酸含量也少一点。你想啊，难裂解的都可以直接裂解了做PCR，更何况容易裂解的。
Triton X-100破膜加蛋白酶裂解这个想法是可以的，只是Triton X-100的添加量要自己试一下，而且蛋白酶 ...

亲，你们提取肉类的DNA有啥快速方法没？
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6楼2014-09-29 15:59:35
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
液氮研磨然后提取既可以了。

倒是必须加蛋白酶裂解。
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天行健
7楼2014-09-29 16:04:41
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koujie1986

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by a599209150 at 2014-09-29 15:59:35
亲，你们提取肉类的DNA有啥快速方法没？...

都是用foregene、天根这些国产试剂盒提的。一方面试剂盒里面的成分都比较成熟，不需要自己去调整；另一方面提取时间都差不多，一两个小时就整完了
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8楼2014-09-29 16:13:23
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