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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 提取DNA的过程中， 怎样做才是无菌操作提取DNA呢？
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WSXP1104

新虫 (小有名气)

[交流] 提取DNA的过程中， 怎样做才是无菌操作提取DNA呢？

试验目的：研究肉在贮藏期间的微生物的构成及多样性。    提取DNA的过程中，在酒精灯上移取肉的稀释液，后面加试剂盒的时候应该怎样操作呢？    怎样做才是无菌操作提取DNA呢？
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1楼 2014-04-10 09:28:53
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woolley

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
WSXP1104(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-04-10 12:48:14
要做到完全的无菌其实挺麻烦的
需要考虑的因素有：
质粒纯化的加样过程都要在超净台中完成。
加样的枪头灭菌
柱子的吹干的时候要在超净台
收集用的试管灭菌，而且由于最后一步是开盖离心，你最好换掉那个开盖的试管
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2楼2014-04-10 11:28:26
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
WSXP1104: 金币+2 2014-04-11 08:36:30
引用回帖:
4楼: Originally posted by WSXP1104 at 2014-04-10 12:54:06
有富集的影响。大多数微生物还是体外培养不出来的。
直接提取肉中微生物的基因组。...

个人观点，不用严格无菌操作也行，做个阴性对照：同样的“肉的稀释液”进行高温高压灭菌处理后，与实验样品一同提取，从阴性对照看就知道有哪些菌是污染造成的啦！
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5楼2014-04-10 19:03:06
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普通回帖

Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
"研究肉在贮藏期间的微生物"，能分离出单菌落最靠谱。
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3楼2014-04-10 12:52:06
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WSXP1104

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Lau_Kimura at 2014-04-10 12:52:06
"研究肉在贮藏期间的微生物"，能分离出单菌落最靠谱。

有富集的影响。大多数微生物还是体外培养不出来的。
直接提取肉中微生物的基因组。
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4楼2014-04-10 12:54:06
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Hliotrope

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
移液枪或者移液管灭菌，装样品的EP管什么的灭菌，反正需要用到的又能灭菌的都灭菌，如果需要的话可在超净台里操作。。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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Someone
6楼2014-04-10 19:40:36
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WSXP1104

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Hliotrope at 2014-04-10 19:40:36
移液枪或者移液管灭菌，装样品的EP管什么的灭菌，反正需要用到的又能灭菌的都灭菌，如果需要的话可在超净台里操作。。。

“反正需要用到的又能灭菌的都灭菌，”
移液枪灭菌？？
我是开紫外前把移液枪拿进无菌室，用之前再用酒精表面消毒，然后直接用移液枪加试剂，这并没有在酒精灯上操作。后面操作过程中要去无菌室外面离心7-8次，继续操作前，用酒精擦手、离心管进行表面消毒。

求指点
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7楼2014-04-11 08:45:16
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WSXP1104

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Lau_Kimura at 2014-04-10 19:03:06
个人观点，不用严格无菌操作也行，做个阴性对照：同样的“肉的稀释液”进行高温高压灭菌处理后，与实验样品一同提取，从阴性对照看就知道有哪些菌是污染造成的啦！...

"与试验样品一同提取",阴性对照进行灭菌的同时，非阴性对照是否冰浴？？？   用0.85%的生理盐水稀释的。

每个取样点都需要做阴性对照？？？
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8楼2014-04-11 09:03:38
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Hliotrope

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by WSXP1104 at 2014-04-11 08:45:16
“反正需要用到的又能灭菌的都灭菌，”
移液枪灭菌？？
我是开紫外前把移液枪拿进无菌室，用之前再用酒精表面消毒，然后直接用移液枪加试剂，这并没有在酒精灯上操作。后面操作过程中要去无菌室外面离心7-8次，继 ...

移液枪你又不直接接触菌液，其实我们提DNA都是直接在外面提，也没那么严格，就枪头灭菌，离心管灭菌。。。

[ 发自小木虫客户端 ]
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Someone
9楼2014-04-11 10:01:57
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WSXP1104

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by woolley at 2014-04-10 11:28:26
要做到完全的无菌其实挺麻烦的
需要考虑的因素有：
质粒纯化的加样过程都要在超净台中完成。
加样的枪头灭菌
柱子的吹干的时候要在超净台
收集用的试管灭菌，而且由于最后一步是开盖离心，你最好换掉那个开盖的 ...

"柱子的吹干的时候要在超净台"？吹干？我没有这个步骤。
  
也没有开盖离心。
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10楼2014-04-11 11:09:47
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