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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 怎样提取灵芝子实体DNA
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康葱头

新虫 (正式写手)

[求助] 怎样提取灵芝子实体DNA

在灵芝子实体（菌盖）DNA的提取过程中，遇到两个问题：
1、灵芝子实体DNA提取量太少，跑凝胶电泳几乎没有；
2、提取的DNA呈褐色，本人认为应是色素，那应该怎样去除色素呢？
求大侠们解惑~~~
小女子先行谢过啦~~
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1楼 2012-12-29 16:16:59
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小河弯弯07

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
康葱头: 金币+5, ★★★很有帮助, 很给力！ 2013-01-03 22:14:36
取样时尽量选取菌盖和菌柄连接处的子实体，不要外皮（是干样还是新鲜的？）有颜色部分尽量不要取。CTAB法提的吗？有点色素难免的，多萃取抽提几次，多洗几次试试看。
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2楼2012-12-29 19:15:15
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康葱头

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小河弯弯07 at 2012-12-29 19:15:15
取样时尽量选取菌盖和菌柄连接处的子实体，不要外皮（是干样还是新鲜的？）有颜色部分尽量不要取。CTAB法提的吗？有点色素难免的，多萃取抽提几次，多洗几次试试看。

谢谢您这么快就回复了我的问题；是干样（但是，干样、鲜样不是都差不多吗，我感觉水分都不是很多啊）；您指的不要外皮，是哪部分啊，难道把菌盖的表皮去了？还是怎么？是的，CTAB提的，主要是干样，本来提取出来的DNA就不多，我怕多抽取两次，DNA更没有了。
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3楼2013-01-03 22:12:39
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小河弯弯07

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 康葱头 at 2013-01-03 22:12:39
谢谢您这么快就回复了我的问题；是干样（但是，干样、鲜样不是都差不多吗，我感觉水分都不是很多啊）；您指的不要外皮，是哪部分啊，难道把菌盖的表皮去了？还是怎么？是的，CTAB提的，主要是干样，本来提取出来的 ...

干样好磨一点，把子实体纵向一剖为二，选取菌盖和菌柄相连处组织，有颜色部分不要，多取几管同时提。提DNA有很多细节问题，你上网查查看，可能是某些操作不够规范都可能导致最后提取失败。还是提不出来用进口的试剂盒试试看。
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4楼2013-01-03 22:37:36
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gaoyang636

木虫 (著名写手)
用商业化的kit试试，看看干净点不？
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5楼2013-01-04 10:53:09
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康葱头

新虫 (正式写手)
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4楼: Originally posted by 小河弯弯07 at 2013-01-03 22:37:36
干样好磨一点，把子实体纵向一剖为二，选取菌盖和菌柄相连处组织，有颜色部分不要，多取几管同时提。提DNA有很多细节问题，你上网查查看，可能是某些操作不够规范都可能导致最后提取失败。还是提不出来用进口的试 ...

干样好磨些啊？我还觉得鲜样会好磨些呢
相对来说，干样的DNA是不是会损失很多啊，特别是放很久的了。
嗯，我按照您的方法试下吧，谢谢您啊！
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6楼2013-01-05 09:51:29
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康葱头

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gaoyang636 at 2013-01-04 10:53:09
用商业化的kit试试，看看干净点不？

谢谢！
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7楼2013-01-05 10:12:33
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小河弯弯07

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 康葱头 at 2013-01-05 09:51:29
干样好磨些啊？我还觉得鲜样会好磨些呢
相对来说，干样的DNA是不是会损失很多啊，特别是放很久的了。
嗯，我按照您的方法试下吧，谢谢您啊！...

灵芝还好了，其他蘑菇鲜样水分多，液氮冻了容易结块，不好磨滴~
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8楼2013-01-05 14:01:01
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康葱头

新虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 小河弯弯07 at 2013-01-05 14:01:01
灵芝还好了，其他蘑菇鲜样水分多，液氮冻了容易结块，不好磨滴~...

我取了三个部位的鲜样进行提取，分别是你所说的连接处、菌盖的边缘（刚长出子实体时菌盖边缘是白色），还有褐色的菌盖，最后提取出来的效果确实是连接处的最好，没什么颜色，我就想请问下为什么菌盖的边缘提取出来的ＤＮＡ也有颜色啊，按理说它是白色的，应该没什么色素的啊
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9楼2013-01-13 18:29:30
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小河弯弯07

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 康葱头 at 2013-01-13 18:29:30
我取了三个部位的鲜样进行提取，分别是你所说的连接处、菌盖的边缘（刚长出子实体时菌盖边缘是白色），还有褐色的菌盖，最后提取出来的效果确实是连接处的最好，没什么颜色，我就想请问下为什么菌盖的边缘提取出来 ...

这个我也不知道哦，你做实验真认真~
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10楼2013-01-14 10:41:44
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