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康葱头

新虫 (正式写手)

[求助] 怎样提取灵芝子实体DNA

在灵芝子实体(菌盖)DNA的提取过程中,遇到两个问题:
1、灵芝子实体DNA提取量太少,跑凝胶电泳几乎没有;
2、提取的DNA呈褐色,本人认为应是色素,那应该怎样去除色素呢?
求大侠们解惑~~~
小女子先行谢过啦~~
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小河弯弯07

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
康葱头: 金币+5, ★★★很有帮助, 很给力! 2013-01-03 22:14:36
取样时尽量选取菌盖和菌柄连接处的子实体,不要外皮(是干样还是新鲜的?)有颜色部分尽量不要取。CTAB法提的吗?有点色素难免的,多萃取抽提几次,多洗几次试试看。
2楼2012-12-29 19:15:15
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康葱头

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小河弯弯07 at 2012-12-29 19:15:15
取样时尽量选取菌盖和菌柄连接处的子实体,不要外皮(是干样还是新鲜的?)有颜色部分尽量不要取。CTAB法提的吗?有点色素难免的,多萃取抽提几次,多洗几次试试看。

谢谢您这么快就回复了我的问题;是干样(但是,干样、鲜样不是都差不多吗,我感觉水分都不是很多啊);您指的不要外皮,是哪部分啊,难道把菌盖的表皮去了?还是怎么?是的,CTAB提的,主要是干样,本来提取出来的DNA就不多,我怕多抽取两次,DNA更没有了。
3楼2013-01-03 22:12:39
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小河弯弯07

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 康葱头 at 2013-01-03 22:12:39
谢谢您这么快就回复了我的问题;是干样(但是,干样、鲜样不是都差不多吗,我感觉水分都不是很多啊);您指的不要外皮,是哪部分啊,难道把菌盖的表皮去了?还是怎么?是的,CTAB提的,主要是干样,本来提取出来的 ...

干样好磨一点,把子实体纵向一剖为二,选取菌盖和菌柄相连处组织,有颜色部分不要,多取几管同时提。提DNA有很多细节问题,你上网查查看,可能是某些操作不够规范都可能导致最后提取失败。还是提不出来用进口的试剂盒试试看。
4楼2013-01-03 22:37:36
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

用商业化的kit试试,看看干净点不?
5楼2013-01-04 10:53:09
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康葱头

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小河弯弯07 at 2013-01-03 22:37:36
干样好磨一点,把子实体纵向一剖为二,选取菌盖和菌柄相连处组织,有颜色部分不要,多取几管同时提。提DNA有很多细节问题,你上网查查看,可能是某些操作不够规范都可能导致最后提取失败。还是提不出来用进口的试 ...

干样好磨些啊?我还觉得鲜样会好磨些呢
相对来说,干样的DNA是不是会损失很多啊,特别是放很久的了。
嗯,我按照您的方法试下吧,谢谢您啊!
6楼2013-01-05 09:51:29
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康葱头

新虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by gaoyang636 at 2013-01-04 10:53:09
用商业化的kit试试,看看干净点不?

谢谢!
7楼2013-01-05 10:12:33
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小河弯弯07

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 康葱头 at 2013-01-05 09:51:29
干样好磨些啊?我还觉得鲜样会好磨些呢
相对来说,干样的DNA是不是会损失很多啊,特别是放很久的了。
嗯,我按照您的方法试下吧,谢谢您啊!...

灵芝还好了,其他蘑菇鲜样水分多,液氮冻了容易结块,不好磨滴~
8楼2013-01-05 14:01:01
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康葱头

新虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 小河弯弯07 at 2013-01-05 14:01:01
灵芝还好了,其他蘑菇鲜样水分多,液氮冻了容易结块,不好磨滴~...

我取了三个部位的鲜样进行提取,分别是你所说的连接处、菌盖的边缘(刚长出子实体时菌盖边缘是白色),还有褐色的菌盖,最后提取出来的效果确实是连接处的最好,没什么颜色,我就想请问下为什么菌盖的边缘提取出来的DNA也有颜色啊,按理说它是白色的,应该没什么色素的啊
9楼2013-01-13 18:29:30
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小河弯弯07

银虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 康葱头 at 2013-01-13 18:29:30
我取了三个部位的鲜样进行提取,分别是你所说的连接处、菌盖的边缘(刚长出子实体时菌盖边缘是白色),还有褐色的菌盖,最后提取出来的效果确实是连接处的最好,没什么颜色,我就想请问下为什么菌盖的边缘提取出来 ...

这个我也不知道哦,你做实验真认真~
10楼2013-01-14 10:41:44
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