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louisa俊

银虫 (小有名气)

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[求助] 判断引物是否适合用于qRT-PCR 已有2人参与

跟别人借了几种引物，当时他说，有的引物可以做实时定量荧光PCR，有的只能做普通PCR。我做了预实验，将所有的引物都进行qRT-PCR了，结果有的CT值在20左右，有的接近30，甚至35。想求助一下，是否CT值接近30了，就说明这引物不适合做qRT-PCR? 不适合做qRT-PCR的引物，如果进行下一步呢？是直接将cDNA用普通的PCR仪器进行扩增，然后再跑琼脂糖凝胶电泳？还是直接将qPT-PCR的产物进行电泳呢？谢谢啦！

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1楼 2014-09-28 15:08:32

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20084032134

银虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

CT值在15-35都是可以用的，只是你要看你的熔融曲线峰是否单一，不要有杂峰！还有你可以普通PCR跑个电泳看看，加个marker，看能跑出来不。

赞一下(1人)

永不言弃

4楼2014-10-08 19:18:42

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