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忘记将来木虫 (正式写手)
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荧光定量PCR 疑难杂症 已有2人参与
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这几天跑的荧光定量PCR结果很糟糕；请有经验的大侠指点一二： 基因拷贝数偏低，Ct值开始40左右，优化后30-32，但是问题出现了，NTC也有扩增了，换了一管新的引物（干粉稀释）结果还是一样，根据溶解曲线判断应该是产物 在荧光定量前，用普通PCR鉴定过，条带大小和测序结果都对；用荧光定量pcr的结果跑电泳，条带位置跟以前一样（包括NTC）；30左右拷贝数应该也有10的3次方了，难道是产物污染？？？ 还有就是荧光信号很低，会是假阳性扩增么？？？？还是因为模板的拷贝数很低造成的？模板加量已经很多，为什么实验组跟NTC的Ct值几乎一样呢？？？？ |
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