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忘记将来

木虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量PCR 疑难杂症 已有2人参与

这几天跑的荧光定量PCR结果很糟糕;请有经验的大侠指点一二:
基因拷贝数偏低,Ct值开始40左右,优化后30-32,但是问题出现了,NTC也有扩增了,换了一管新的引物(干粉稀释)结果还是一样,根据溶解曲线判断应该是产物
在荧光定量前,用普通PCR鉴定过,条带大小和测序结果都对;用荧光定量pcr的结果跑电泳,条带位置跟以前一样(包括NTC);30左右拷贝数应该也有10的3次方了,难道是产物污染???
还有就是荧光信号很低,会是假阳性扩增么????还是因为模板的拷贝数很低造成的?模板加量已经很多,为什么实验组跟NTC的Ct值几乎一样呢????
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忘记将来

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by chenguestc at 2014-09-26 08:50:04
是的哈,我就是用的灭菌超纯水原来。。。。...

好,试试看,谢谢!
5楼2014-09-26 09:10:10
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-09-25 21:37:18
忘记将来: 金币+3, 谢谢 2014-09-26 09:10:25
你的阴性对照,或者说水是什么水?是公司买的嘛?还是去离子水灭菌的?
以前也遇到过类似现象,换了水之后就行了,不知道是否符合你的情况
2楼2014-09-25 13:59:15
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忘记将来

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by chenguestc at 2014-09-25 13:59:15
你的阴性对照,或者说水是什么水?是公司买的嘛?还是去离子水灭菌的?
以前也遇到过类似现象,换了水之后就行了,不知道是否符合你的情况

不是买的,是灭菌的超纯水。
3楼2014-09-25 15:00:16
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 忘记将来 at 2014-09-25 15:00:16
不是买的,是灭菌的超纯水。...

是的哈,我就是用的灭菌超纯水原来。。。。
4楼2014-09-26 08:50:04
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