| 查看: 7391 | 回复: 5 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
卡西西VS鸣人金虫 (小有名气)
|
[求助]
连接载体转化后挑单菌落，菌落pcr扩出条带，但是摇菌摇不起来 已有3人参与
|
|
|
载体是连接有EGFP的瞬时表达载体，有氨苄抗性。转化到DH5α中，涂含氨苄的平板。倒置培养12个小时候未见菌落，但是17个小时候有菌落，且密度不是很大，单菌落数不多不少的样子。我先是挑单菌落摇菌，准备做菌液pcr，但是37°C转速200培养过夜之后LB培养基仍然是清亮的，没有任何菌生长。再挑单菌落，换了别人配的LB震荡培养，仍然是没有摇起来。最后我挑单菌落加到20μl的水中做菌落pcr，设置了空白对照，pcr结果显示空白对照没有条带，其它菌落pcr只有两个未扩出条带。将pcr条带最亮的几管分别加到4mlLB培养基中，再加入4μl氨苄，37°C振荡培养过夜。最后居然还是没有菌落生长，培养基一片清亮······ 我在网上查到说，挑单菌落的时候可能挑到平板上未干的连接液，连接液里可能含有未连接到载体上的目的片段，所以pcr可以扩出条带。但是我很确定我挑到了菌落，肉眼看到菌落慢慢的分散开来然后水变浑浊。即使是空载，摇菌应该也能摇起来。平板是刚刚倒的，氨苄的作用肯定存在。氨苄也没问题，别人刚用过我直接拿过来用的，别人的结果没出问题。 以前挑过很多次菌，菌液pcr也做过，，都没有发生这种状况。我觉得我的操作没有问题，但是实在是找不到原因了，哪位高手给指点一下啊…… 昨天刚刚又转化了一次，现在已经有14个小时了，肉眼只能看到几个小菌落。一般来说12个小时应该就长得差不多了。转化涂板用的是新配制的氨苄板，菌落生长缓慢会不会是感受态细菌的问题呢？细菌没有接受外源抗性质粒的活性了，但还是能缓慢的在含氨苄的平板上生长，在含有氨苄的LB液体培养基里培养24个小时也不会快速的生长。是不是这样呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有117人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 转化时，长出白色单菌落，菌落ＰＣＲ后有条带，在培养，提质粒，没有条带，怎么回事
已经有4人回复
- 重组质粒转入BL21后，平板可以长，但挑单克隆菌摇不起来
已经有17人回复
- 质粒构建，挑单菌落验证总是假阳性，求分析原因？！
已经有29人回复
- PCR产物做克隆，菌液涂平板后长得很慢是什么原因？
已经有17人回复
- 挑单克隆后摇菌摇不起来的问题
已经有22人回复
- 挑单菌落，摇不起来
已经有11人回复
- 大肠杆菌是污染了么？摇不起来
已经有3人回复
- 请问摇菌后的菌液怎么保存，谢谢
已经有10人回复
- 挑取单菌落到液体培养基中不长的原因
已经有4人回复
- 转化涂板长不出单菌落
已经有17人回复
- 基因与载体连接转化后涂版长出了菌，提质粒却没有提出来，不知道什么原因？？
已经有17人回复
- 感受态转化后，没有出现单菌落但菌长了一大片
已经有11人回复
- 连接转化后长出抗性菌落后的LB培养基能保存多长时间
已经有5人回复
- 紧急求助。。。。摇菌摇不起来，要多郁闷有多郁闷啦
已经有20人回复
- 转化后菌落pcr有目的条带，小摇长菌，再大摇不长了，求帮助~
已经有14人回复
- 关于挑取单菌落
已经有6人回复
- 挑取单菌落的问题
已经有8人回复
- 做菌落总数测定，长出的菌不是单菌落
已经有25人回复
- 菌摇不起来为什么啊
已经有5人回复
- 菌液扩摇为什么老摇不出来呢
已经有11人回复
- 【求助/交流】单菌落过夜摇菌为什么摇不出来呀？急求
已经有33人回复
5楼2016-04-18 21:30:23
zero19871029
新虫 (小有名气)
- 应助: 29 (小学生)
- 金币: 16
- 散金: 9
- 红花: 1
- 帖子: 144
- 在线: 33.4小时
- 虫号: 2534398
- 注册: 2013-07-05
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
2楼2014-09-24 17:28:10
3楼2014-09-25 19:10:53
hmily890404
新虫 (小有名气)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 1376.4
- 红花: 1
- 帖子: 145
- 在线: 20.7小时
- 虫号: 1441321
- 注册: 2011-10-13
- 性别: MM
- 专业: 农业昆虫学
4楼2014-11-29 20:29:01
