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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大肠杆菌是污染了么？摇不起来
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LWL8798

新虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌是污染了么？摇不起来 已有3人参与

我做蛋白诱导，刚开始的时候条件什么的都已经摸好了，但是最近我们实验室的菌有时候正常有时候不正常，我重新做了转化，有的菌在试管中摇起来了，我转到瓶子里长到0.22左右就不长了，还有种情况就是长到0.6加IPTG后，过夜诱导，第二天的时候菌没有长，OD值还是0.6，这是噬菌体污染么？如果是的话是不是要把整个实验室全部打扫啊！
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1楼 2014-01-02 21:15:05
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20083630zhan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-01-03 09:44:30
确定是不是噬菌体污染，你可以取你认为长得不好的菌，图平板，配这样，如果是噬菌体污染的话，会有明显的噬菌斑，在这就是，菌体有的长得快有的长得慢，这根你保菌的时候菌体的生理状况和浓度有很大关系。
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2楼2014-01-02 21:43:32
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-01-03 09:44:34
检查下培养液的配置是否有问题，测下pH是不是太酸。
至于长到0.6加IPTG不长这很正常。大量诱导外源蛋白往往对宿主本身都是由抑制的。有些情况甚至造成部分菌体裂解。
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3楼2014-01-03 00:34:09
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b6122

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-01-03 09:44:37
遇到过这种情况。不排除是污染。我试过配抗生素和IPTG的时候都加入20%酒精。挑菌的时候枪头要灭菌，如果枪不能灭菌的话，至少枪和枪头接触的地方要用70%酒精喷。诱导时降低温度，用16度过夜试试。另外，如果你不能用生物安全柜的话，至少要在火焰旁边操作。
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4楼2014-01-03 01:25:15
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