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金晓柒

木虫 (初入文坛)

[求助] 小球藻PCR相关问题,急求助!! 已有1人参与

各位大神,我最近想做小球藻里面某一基因的荧光定量,在利用引物进行退火温度摸索时,什么都P不出来,2个多月了,引物也换过,大家有做藻的吗,做的时候有什么需要注意的吗,比如退火温度之类的,请各位大神帮忙,我是新接触这个,确实很迷茫,急死了,这里先谢过各位了。
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说腻早安

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

首先,建议提取藻的DNA来做PCR或者用TE在100°C煮10min然后用上清来PCR。
其次,初始的变性时间稍微延长一点,10min左右,退火温度的话,你还是用梯度摸索一下。
最后,延伸时间2min,30个循环左右。
2楼2015-06-23 09:38:03
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