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金晓柒

木虫 (初入文坛)

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虫号: 2150810
注册: 2012-11-27
专业: 微生物生理与生物化学

[求助] 小球藻PCR相关问题，急求助！！已有1人参与

各位大神，我最近想做小球藻里面某一基因的荧光定量，在利用引物进行退火温度摸索时，什么都P不出来，2个多月了，引物也换过，大家有做藻的吗，做的时候有什么需要注意的吗，比如退火温度之类的，请各位大神帮忙，我是新接触这个，确实很迷茫，急死了，这里先谢过各位了。

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1楼 2014-09-22 09:29:56

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说腻早安

铁虫 (初入文坛)

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专业: 微生物遗传学

【答案】应助回帖

首先，建议提取藻的DNA来做PCR或者用TE在100°C煮10min然后用上清来PCR。
其次，初始的变性时间稍微延长一点，10min左右，退火温度的话，你还是用梯度摸索一下。
最后，延伸时间2min，30个循环左右。

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