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用来酶切的质粒要求
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三蛰
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用来酶切的质粒要求
已有3人参与
之前没有想到这个问题,最近看到一些帖子才突然有这方面的疑问,希望大家不吝赐教。
就是用来做酶切线性化的质粒,在提取后跑电泳,必须要二/三条带吗?
如果质粒是一条带,那么说明所得的质粒大都为线性化的质粒,无法再用正确的限制性内切酶来酶切进行转化。
是不是这样呢?
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【求助/交流】质粒pPICZA酶切问题
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我不会!
1楼
2014-09-02 15:08:48
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huyan0817
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【答案】应助回帖
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三蛰(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流
2014-09-02 20:20:02
没有懂楼主的意思,不过酶切未必会是2条或3条带,如果是单酶切而且质粒上面只有一个相应的酶切未点,那么电泳结果是一条带,如果有2个酶切位点,也不一定会显示出2个条带,要看酶切片段大小!
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3楼
2014-09-02 17:30:44
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miaoshuang
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专业: 植物生理与生化
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流
2014-09-02 20:19:57
不一定,我一条带也切过,没问题的
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努力,勇敢向前走,一切皆有可能
2楼
2014-09-02 17:29:19
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hongqifei
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虫号: 582655
注册: 2008-07-25
性别: GG
专业: 人类遗传学
环形质粒电泳也不一定就是2~3条带,有时候也可能一大团的样子(看起来像一条带,但是和酶切线性化的条带完全不同),这个和质粒所处的溶液有关吧。只要酶切后条带单一、大小正确,我觉得完全没有问题。
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何须剑道争锋?千人指,万人封,可问江湖鼎峰,三尺秋水尘不染,天下无双。
4楼
2014-09-02 22:53:49
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xipha
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虫号: 447837
注册: 2007-11-01
专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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三蛰: 金币+7
2014-09-03 15:00:09
这个不要紧的, 该切切. 回头连接的时候,T4就直接顺便连回去了.
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5楼
2014-09-03 00:01:32
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