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梦锁深秋2005

银虫 (小有名气)

[求助] 枯草芽孢杆菌PCR扩增不出来的问题 已有7人参与

本人新入手了一株枯草芽孢杆菌,想进行基因敲除。可同源臂却一直扩增不出来。提的基因组甚至都跑了电泳,条带都能看得见,引物也是根据NCBI上的序列设计的。PCR用的东西都没有问题,中间引物也换了好几对了,也从其他实验室借过其他的枯草芽孢杆菌,但就是P不出来,这是怎么回事啊。
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梦锁深秋2005

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by bio_sci at 2014-08-25 14:26:34
引物有问题的可能性最大

我之前做的酵母,一直都是这样设计的引物,一直没有问题,引物换过好几对,也让之前做过枯草的人设计过,但就是不行
4楼2014-08-25 15:46:01
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查看全部 17 个回答

huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
梦锁深秋2005(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-25 22:47:23
梦锁深秋2005: 金币+5 2014-08-26 15:29:27
根据楼主提供的信息排除了模板有问题的情况,那多半是引物的问题,设计兼并引物试一下!祝好运!
2楼2014-08-25 13:26:26
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
梦锁深秋2005: 金币+4 2014-08-26 15:29:48
引物有问题的可能性最大

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-08-25 14:26:34
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johnkm66

新虫 (初入文坛)


【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
梦锁深秋2005(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-27 19:01:00
P不出来具体是什么情况?完全没有条带还是有但很淡?PCR不出结果的原因很多,包括模版、试剂、引物、操作等,甚至仪器也会有很大影响。
5楼2014-08-26 14:32:43
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