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shen_41745

金虫 (小有名气)

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[求助] 蛋白双向电泳问题咨询已有2人参与

我跑的蛋白双向电泳蛋白点总是那么少，而且横向拖尾一直解决不了，哪位大神给点意见啊？

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1楼 2014-08-25 09:43:22

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王平阳

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【答案】应助回帖

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shen_41745(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-25 22:41:45

横向拖尾应该是第一向等电聚焦出了问题，一般跑出来的蛋白点是圆的才正常。
你可以从以下几个方面检查：
1、第一向8000V或者10000V的电压有没有升上去，如果没有，横向会出现拖尾或者聚在一起分不开；
2、检查水化液试剂是否失效，其中Destreak Reagent就是专门用来消除拖尾的；
3、IPG Buffer切记加多，否则影响结果；
4、第一向上等电聚焦仪的时候检查胶槽电极是否与电极板贴合紧密，之间是否有杂物（灰尘、水汽）

以上个人见解，仅供参考