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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组大肠杆菌表达蛋白可溶，但无活性
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1楼 2014-08-20 15:45:50
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jpfwx

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by pingweihh at 2014-08-20 21:45:02
那是不是大肠杆菌就不能表达同一单体的多聚体蛋白呢？我的目的蛋白在跑SDS-PAGE时，目的条带是在单体位置。带标签的也能体外复性形成四聚体吗？...

可以复性。不过用大肠杆菌做具有高级结构的蛋白是有些难度。但是也是可以做的，如果菌株鉴定正确可以试一下诱导条件，低温、低浓度IPTG、长时间诱导等。以前我做过周质表达，不多量非常少。
你SDS是还原还是非还原？如果非还原也看不到四聚体条带的话那就是没有。
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年轻，拼搏
7楼2014-08-21 09:09:39
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jpfwx

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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pingweihh(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-20 16:54:39
pingweihh: 金币+12, 5 2014-08-21 09:03:45
首先可以确定一点，相同单体构成的四聚体是因为产生了高级结构，一般是二硫键的形成，这样才会有生物活性。
不知道你的四聚体的高级结构是怎么样的。但是大肠杆菌表达的蛋白是不能自己进行后修饰的，也就是说不会将单体正确的组装成有活性的四聚体。你电泳跑出来的蛋白是不是单体的位置？
如果确定单体是正确的可溶表达，你可以试试进行体外复性，看看能不能形成有活性的四聚体。
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年轻，拼搏
2楼2014-08-20 15:57:46
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bio_sci

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【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
pingweihh(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-20 16:54:59
碰到过类似情况，一般四级结构是会自发形成的，也就是说亚基表达出来后，会自动聚合在一起。这种四级结构有时候，SDS-PAGE也不一定能够将其打开。
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3楼2014-08-20 16:01:56
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匿名

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4楼2014-08-20 21:45:02
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