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andyzhengwp金虫 (小有名气)
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[求助]
关于in-fusion PCR问题 已有4人参与
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我现在要将一个片段无缝的插入到一个质粒的特定位点中，Clontech的In-Fusion试剂盒已经买了，但是发现它需要将质粒线性化，如果酶切线性化的话将不是无缝连接，会有几个碱基多出来，质粒有太大无法pcr方法线性化。 求助：1，有没有好的方法师质粒不加碱基线性化（酶切之后再PCR，肯定会在以前质粒的基础上多出几个碱基来的）？ 2.或者有什么好的方法直接实现将一个片段无缝的插入到一个质粒的特定位点中？ |
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ksws0465326
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【答案】应助回帖
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按正常情况的话，如果序列相同的质粒和线性化条带跑电泳，应该差不多，质粒会稍微慢一点儿，但没做过对比，不清楚，呵呵，一般我跑都是1%的胶100v跑40－50分钟。。5000的marker可以分得很清。还有，单跑质粒的时候有可能会出现两倍或三倍于质粒bp的条带，跟人觉得这也有可能是质粒重叠造成的。 |
andyzhengwp10楼2014-08-20 11:19:16
2楼2014-08-19 12:40:35
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3楼2014-08-19 13:32:12
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4楼2014-08-19 14:52:12