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伸手触梦

银虫 (正式写手)

[求助] 转录组测序中EST、reads和map的意思 已有1人参与

差资料知道EST是从已建好的cDNA库中随机取出一个克隆,从5’末端或3’末端对插入的cDNA片段进行一轮单向自动测序,所获得的约60-500bp的一段cDNA序列那既然知道cDNA的序列为什么还要测这些小片段的序列,不是多此一举吗?还有所获得的约60-500bp的一段cDNA序列只是靠近5’末端或3’末端的60-500bp序列,还是从5’末端或3’末端依次测一段60-500bp的cDNA序列后,又接着测下一个60-500bp的一段cDNA序列呢,有点不懂它说的单向测序获得的60-500bp的一段cDNA序列是怎样获得的?转录组测序reads和map的意思也不懂?请大侠不吝赐教啊
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伸手触梦

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by BioChen at 2014-08-18 17:53:33
cDNA是有特异性的,不同细胞、不同时期、不同状态,它的cDNA都有可能不同。所以各种EST序列都是有价值的。
有一个顺序你搞反了,是先有EST数据库,才有cDNA数据库的。
EST序列是随机的短片段序列,序列的延伸不是 ...

多谢您的帮助,我懂了许多。但还有几个不明白的地方:1,资料上说“EST是从已建好的cDNA库中随机取出一个克隆”,如果像您说的那样,先有EST,那最初的EST就是在测序时偶然发现的新片段咯,然后上传到NCBI上的dbEST,是这样吗?2,dbEST库是怎样用的呢,那是测序公司需要去比对的吗,我们一般用不到那个数据库是吧?不甚感激!!!
3楼2014-08-18 20:26:24
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BioChen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+5, 鼓励回帖交流! 2014-08-18 18:09:27
伸手触梦: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2014-08-20 20:48:41
cDNA是有特异性的,不同细胞、不同时期、不同状态,它的cDNA都有可能不同。所以各种EST序列都是有价值的。
有一个顺序你搞反了,是先有EST数据库,才有cDNA数据库的。
EST序列是随机的短片段序列,序列的延伸不是做紧接着做实验做出来的,而是计算机拼接。
做转录组测序的流程,你可以去网上找资料看看。
一个read(读长)就是一条测序结果,一次测序大概会有几百万到上亿的reads,随着你的测序深度不同而异。
一个read,大概也就100bp左右,如果给你一大堆100bp左右的东西,你是看不懂的,所以要map(匹配)到基因组上,告诉这些片段一一属于那个基因,或者说每一个基因有多少片段。这样你就能做差异分析或者其他分析了。
不知道我说明白了没?
2楼2014-08-18 17:53:33
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BioChen

银虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 伸手触梦 at 2014-08-18 20:26:24
多谢您的帮助,我懂了许多。但还有几个不明白的地方:1,资料上说“EST是从已建好的cDNA库中随机取出一个克隆”,如果像您说的那样,先有EST,那最初的EST就是在测序时偶然发现的新片段咯,然后上传到NCBI上的dbES ...

是的,我们提取细胞RNA,然后反转录成cDNA,这就是一个cDNA库(cDNA library),和cDNA数据库是两回事哦。
你这样理解EST数据库,没什么问题。
据我所知,测序公司也不会拿转录组测序结果去比对dbEST。
如果一段序列出现在dbEST上了,说明它被转录了,可以从dbEST数据库中发现新的基因。至于它还有其他什么应用,你去ncbi看官方文档吧。
4楼2014-08-19 19:41:45
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伸手触梦

银虫 (正式写手)

哎 现在来处理,忘记评分了,而现在怎么没法评分了
5楼2015-04-14 11:25:11
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