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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR引物二聚体的问题
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悠悠飘杨

新虫 (小有名气)

[求助] PCR引物二聚体的问题 已有3人参与

请问大家，PCR产生引物二聚体时一般加5%的DMSO解除，但是如果加多了，会不会对PCR产生什么不好的影响？
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1楼 2014-07-29 10:24:20
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柠萌粉

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-07-29 11:59:03
引物二聚体多的时候少加点引物，提高退火温度就可以了
DMSO 5%以内是比较安全的，可以提高特异性，超过这个数字，可能就会对聚合酶产生一致
推荐还是用减少引物，提高退火温度的方法，DMSO实在要加，也别超过5%
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2楼2014-07-29 11:10:21
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 鼓励发帖积极交流。 2014-07-29 11:59:10
加DMSO的时候退火温度也要适当降一点
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大家相互帮助哈
3楼2014-07-29 11:47:10
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linzshit

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-29 18:22:37
我在clinic chemistry上看到有篇关于写Tm计算方式的文章，它上面给出的实际数据时DMSO每上涨1%，Tm下降0.75℃，当然了，具体可能不是这么多，当个参考。
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4楼2014-07-29 15:57:35
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咸鱼~翻身

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by linzshit at 2014-07-29 15:57:35
我在clinic chemistry上看到有篇关于写Tm计算方式的文章，它上面给出的实际数据时DMSO每上涨1%，Tm下降0.75℃，当然了，具体可能不是这么多，当个参考。

求该文章，谢谢！
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5楼2014-07-30 08:10:54
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linzshit

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 咸鱼~翻身 at 2014-07-30 08:10:54
求该文章，谢谢！...

Oligonucleotide Melting Temperatures under PCR Conditions: Nearest-Neighbor Corrections for Mg2+, Deoxynucleotide Triphosphate, and
Dimethyl Sulfoxide Concentrations with Comparison to Alternative Empirical Formulas
这是标题，应该能下载到
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6楼2014-07-30 10:44:25
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悠悠飘杨

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 柠萌粉 at 2014-07-29 11:10:21
引物二聚体多的时候少加点引物，提高退火温度就可以了
DMSO 5%以内是比较安全的，可以提高特异性，超过这个数字，可能就会对聚合酶产生一致
推荐还是用减少引物，提高退火温度的方法，DMSO实在要加，也别超过5%

这个5%是指它在pcr体系中的浓度时5%，还是未加到Pcr体系之前的浓度是5%？
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7楼2014-08-01 10:27:32
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柠萌粉

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 悠悠飘杨 at 2014-08-01 10:27:32
这个5%是指它在pcr体系中的浓度时5%，还是未加到Pcr体系之前的浓度是5%？...

加的应该是纯的DMSO，体系中终体积5%，比如你做25μL体系，不要加超过1.25μL
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8楼2014-08-01 10:41:24
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悠悠飘杨

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 柠萌粉 at 2014-08-01 10:41:24
加的应该是纯的DMSO，体系中终体积5%，比如你做25μL体系，不要加超过1.25μL...

好的，谢谢
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9楼2014-08-01 17:04:37
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二月smile

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 柠萌粉 at 2014-07-29 11:10:21
引物二聚体多的时候少加点引物，提高退火温度就可以了
DMSO 5%以内是比较安全的，可以提高特异性，超过这个数字，可能就会对聚合酶产生一致
推荐还是用减少引物，提高退火温度的方法，DMSO实在要加，也别超过5%

5％的DMSO，是在整个扩增体系（比如25ul）中的体积比吗？
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10楼2016-05-03 20:35:13
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